Seplife LX-MC-Dex1 说明书用户手册.pdf
苏州蓝晓生物科技有限公司
SeplifeLX-MC-Dex1说明书
1.产品介绍
SeplifeLX-MC-Dex1是蓝晓科技自主研发的一种适用于细胞贴附生长的微珠载体,它以
SeplifeG50为基质,表面覆盖带正电荷的DEAE基团。SeplifeLX-MC-Dex1是当前用途最广的
一种微载体,适应培养的细胞类型60余种,主要用于生产疫苗、蛋白质产品等。
2.性能介绍
产品牌号SeplifeLX-MC-Dex1
外观白色颗粒,无臭无味
浮力密度*(g/ml)1.045
颗粒大小(μm)干粉:60-87µm占比70%;湿胶*:145-240
-生理盐水中:145-240
离子交换量(mmolCl/g干粉)1.4-1.6
溶胀*(ml/g干粉)17-22
干燥失重10%
微生物菌落(CFU/g)100
重金属含量(ug/g)5
2
有效培养面积*(cm/g)3500-5500
vero
功能性测试,细胞,测试组与对
0.8
照组斜率比值
应用适合贴壁依赖型细胞的悬浮培养,用于生产疫苗及蛋白等
*生理盐水中
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苏州蓝晓生物科技有限公司
3.使用方法
3.1微载体预处理
首先,干燥的微载体在无Ca2+和Mg2+的磷酸缓冲液(PBS,pH=7.4)(每克微载体加
50-100ml)中在室温下浸泡膨胀至少3小时。然后,弃去上清液,用新配制的无Ca2+、Mg2+的
PBS(pH=7.4)(每克微载体加30-50ml)洗涤微载体数分钟。接着,弃去PBS,换上新的无
Ca2+、Mg2+的PBS(pH=7.4)(每克微载体加30-50ml)。之后,微载体溶液用高压灭菌法灭
菌(115℃,15min,15psi)。微载体LX-MC-dex1非常稳定,可以反复(至少5次)长时间
(130°C,12h,27psi)进行高压灭菌而不影响其性能。灭菌结束后使用前,加入培养基润洗置
换(20-50ml/g),之后加入10%血清放置过夜。
3.2微载体培养
准备好消化好的细胞,连同之前准备好的微载体一起加入方瓶或反应器中(微载体加量
1-5g/L),在一定条件下开始培养,4小时后观察细胞贴附情况。如果细胞贴附良好,继续跟踪
培养,观察细胞生长情况。
3.3微载体培养操作要点
(1)培养初期:保证培养基与微球体处于稳定的pH与温度水平,接种细胞(对数生长期,
而非稳定期)至终体积1/3的培养液中,以增加细胞与微载体接触的机会。常使用2-3g/L的微
载体含量,更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。
由于动物细胞无细胞壁,对剪切力敏感,因而无法靠提高搅拌转速来增加接触概率。通常
的操作方式是:在贴壁期采用低搅拌转速,时搅时停;数小时后,待细胞附着于微载体表面时,
维持设定的低转速,进入培养阶段。微载体培养的搅拌非常慢,最大速度75r/min。
(2)贴壁阶段(3-8d)后,缓慢加入培养液至工作体积,并且增加搅拌速度保证完全均质
混合。
(3)培养维持期:进行细胞计数(胞核计数)、葡萄糖测定及细胞