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Seplife LX-MC-Dex1 说明书用户手册.pdf

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苏州蓝晓生物科技有限公司

SeplifeLX-MC-Dex1说明书

1.产品介绍

SeplifeLX-MC-Dex1是蓝晓科技自主研发的一种适用于细胞贴附生长的微珠载体,它以

SeplifeG50为基质,表面覆盖带正电荷的DEAE基团。SeplifeLX-MC-Dex1是当前用途最广的

一种微载体,适应培养的细胞类型60余种,主要用于生产疫苗、蛋白质产品等。

2.性能介绍

产品牌号SeplifeLX-MC-Dex1

外观白色颗粒,无臭无味

浮力密度*(g/ml)1.045

颗粒大小(μm)干粉:60-87µm占比70%;湿胶*:145-240

-生理盐水中:145-240

离子交换量(mmolCl/g干粉)1.4-1.6

溶胀*(ml/g干粉)17-22

干燥失重10%

微生物菌落(CFU/g)100

重金属含量(ug/g)5

2

有效培养面积*(cm/g)3500-5500

vero

功能性测试,细胞,测试组与对

0.8

照组斜率比值

应用适合贴壁依赖型细胞的悬浮培养,用于生产疫苗及蛋白等

*生理盐水中

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苏州蓝晓生物科技有限公司

3.使用方法

3.1微载体预处理

首先,干燥的微载体在无Ca2+和Mg2+的磷酸缓冲液(PBS,pH=7.4)(每克微载体加

50-100ml)中在室温下浸泡膨胀至少3小时。然后,弃去上清液,用新配制的无Ca2+、Mg2+的

PBS(pH=7.4)(每克微载体加30-50ml)洗涤微载体数分钟。接着,弃去PBS,换上新的无

Ca2+、Mg2+的PBS(pH=7.4)(每克微载体加30-50ml)。之后,微载体溶液用高压灭菌法灭

菌(115℃,15min,15psi)。微载体LX-MC-dex1非常稳定,可以反复(至少5次)长时间

(130°C,12h,27psi)进行高压灭菌而不影响其性能。灭菌结束后使用前,加入培养基润洗置

换(20-50ml/g),之后加入10%血清放置过夜。

3.2微载体培养

准备好消化好的细胞,连同之前准备好的微载体一起加入方瓶或反应器中(微载体加量

1-5g/L),在一定条件下开始培养,4小时后观察细胞贴附情况。如果细胞贴附良好,继续跟踪

培养,观察细胞生长情况。

3.3微载体培养操作要点

(1)培养初期:保证培养基与微球体处于稳定的pH与温度水平,接种细胞(对数生长期,

而非稳定期)至终体积1/3的培养液中,以增加细胞与微载体接触的机会。常使用2-3g/L的微

载体含量,更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。

由于动物细胞无细胞壁,对剪切力敏感,因而无法靠提高搅拌转速来增加接触概率。通常

的操作方式是:在贴壁期采用低搅拌转速,时搅时停;数小时后,待细胞附着于微载体表面时,

维持设定的低转速,进入培养阶段。微载体培养的搅拌非常慢,最大速度75r/min。

(2)贴壁阶段(3-8d)后,缓慢加入培养液至工作体积,并且增加搅拌速度保证完全均质

混合。

(3)培养维持期:进行细胞计数(胞核计数)、葡萄糖测定及细胞

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