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外周血细胞形态分析标准操作程序

1检验目的

规范外周血细胞形态学检查，对各仪器达到复检规则的样本进行复片检查，

给临床有关疾病的诊断、观察疾病的变化及治疗效果提供重要的参考依据。

2用于检验程序的原理

把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用瑞氏-姬姆萨染料染色，观察各种

细胞数量、形态和质量的变化。

3性能参数

不适用。

4原始样品系统

血液标本详见《血常规标本的采集与处理程序》。

5容器和添加剂类型

血液标本采集的容器是一次性含EDTA-K2抗凝剂的真空采血管；添加剂是

EDTA-K2抗凝剂。

采集方法：准确采集静脉血2.0ml于上述容器中，轻轻颠倒混匀或直接取

手指血20μl。要求量准，采血顺利，不能出现凝块。取手指血或抗凝血于洁净

的玻片上制片。

6所需设备和试剂

6.1仪器、器材：显微镜或DM96自动阅片机、玻片

6.2试剂

6.2.1瑞氏-姬姆萨染色液

6.2.2磷酸盐缓冲液（自配）：称取10克KH2PO4，用1000ml蒸馏水溶解为1%

浓度的KH2PO4溶液，称取7克NaHPO4，用700ml蒸馏水溶解为1%浓度的

2

Na2HPO4溶液，取900毫升1%浓度的KH2PO4溶液和600毫升1%浓度的

Na2HPO4溶液混匀，再用蒸馏水加至3000毫升，充分混匀。配制的缓冲液的pH

值范围应该在6.4-6.8。

7程序步骤

仪器器材/试剂准备→样本编号→制片→染色→镜检→分析测定结果→结果

审核签发。应在取血后4小时内完成血涂片制作。

7.1样本编号

按顺序将样本编号，认真核对检验目的、病人姓名、性别、科室、床号、血

液质量，如有疑问应及时与临床联系。如采血量不够、有凝块或有溶血现象等，

须申请重留标本。

7.2制片

采用SP1000I自动推片机或手工制片。将样本混匀后取5～10ul滴于玻片

上，并在玻片上注明患者姓名、样本编号，推制厚薄适宜的血膜片。

良好血涂片的要求：

①血膜长度25～35mm，宽度18～20mm，血膜四周留有空隙区，且边缘光滑，

血膜终尾离玻片终端至少10mm，血膜均匀，薄如蝉翼，尾端形如弧状，血膜应

呈舌状，具有头、体、尾不同厚薄区域，从厚区到薄区逐步均匀分布。

②血膜末端无粒状、划线或裂隙，所有这些情况会使白细胞集中在这些区域内。

③在镜检区域内，白细胞形态应无人为异常改变。通常，随着保存时间的延长，

抗凝血会造成白细胞形态的改变，如胞浆内形成空泡，核分解破裂等。应将抗凝

血液保存时间的影响减小到最低限度。除部分淋巴细胞增生性疾病外，镜检区域

内破损白细胞量应2％。

④无人为污染。

⑤在1小时内用瑞氏-姬姆萨复合染色液染色；或在1小时内，用无水甲醇（含

水量﹤3%）固定后染色。

7.3染色

采用SP1000I自动推片机或手工染色。推好的血膜在空气中晃动，以促使

快干。天气寒冷或潮湿时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。待

血膜片干燥后，平置于染色架上，滴加染液3～5滴，使其迅速盖满血膜，约1

分钟后，滴加缓冲液5～10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混

合，5～10分钟后用水冲去染液（在室温较低时，应适当延长染色时间），待干。

7.4血涂片的观察方法

采用DM96自动阅片机或显微镜镜检：首先进行白细胞分类，并记录白细胞

形态；连续观察20个视野红细胞的排列、分布及形态；观察血小板分布及形态；

发现血液寄生虫时，应仔细观察，并进行鉴定。具体方法如下：

7.4.1肉眼观察

在观察染色标本时，首先用肉眼对颜色进行观察。如果是正常的血液则呈粉

红色，白血病时白细胞高度增加或骨髓瘤的高γ球蛋白血症等情况下，血涂片

会略带蓝色，此时应意识到可能为异常标本。

7.4.2低倍镜/高倍镜下观察

在低倍镜下浏览全片，观察血涂片制备和染色是否良好、细胞分布是否均匀，

同时可估计白细胞数量增减情况。选择涂片体尾部红细胞分布均匀的体尾交界处

进行油镜观察。

7.4.3油镜下观察

边移动视野边观察下列各项：

（1）染色是否良好：如果血涂片染色确实不好，应重新染色。

（2）观察白细胞形态并进行分类计数，在油镜下计数100个白细胞，按其形态

特征