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解聚复肾宁对糖尿病肾病大鼠肾保护作用机制的研究

导语：本研究观察解聚复肾宁对糖尿病大鼠肾组织肿瘤坏死因子-

α、单核细胞趋化蛋白-1和血清TNF-

α的影响,探讨其肾保护作用机制。由本站硕士论文中心整理。

前言

糖尿病肾病(diabeticnephropat勿，DN)是糖尿病

(diabetesmellitus，DM)严重的微血管并发症之一，其发病机制尚未完全

阐明。近年认为，DN是一种由代谢紊乱引起的炎症性疾病I’]。许多动物

实验及临床资料均提示DN除了糖、脂代谢紊乱，血流动力学异常外，往往

还存在细胞因子、炎症介质水平上升和炎性细胞浸润，故炎症可能单独或

作为上述机制的下游环节，在DM肾损害中起一定作用。肿瘤坏死因子一a(

TNF一a)和单核细胞趋化蛋白一1(MCP一l)是参与DN的两个重要炎症介质[4

，5]。DM状态下，高糖、血流动力学障碍等均可损伤肾脏固有细胞，肾脏

固有细胞在病理状态下可以产生TNF一a、白细胞介素一1(IL一1)、白细胞

介素一6(IL一6)、一氧化氮(NO)等多种炎症因子，这些因子又通过自分泌

和旁分泌方式使炎症效应不断扩大，引起炎症级联反应。

本研究旨在用临床上治疗DN疗效较好的中药复方制剂解聚复肾宁(JJ

FSN)干预STZ诱导的糖尿病大鼠，观察其对DM大鼠肾组织下NF一a、MCP一1

表达及血清TNF一a的作用，探讨其肾保护作用的机制。

1材料与方法

1.1材料与仪器

1.1.1实验动物

8周龄健康雄性sD大鼠55只，体重180一2209，由重庆医科大学实验

动物中心提供。LLZ主要仪器MDF一

382E型一80超低温冰箱OlymPus一BHZ光学显微镜HH一W21一600电热恒温水

箱强生稳豪型血糖测定仪TL一05型离心机DFM一%型多管放射免疫计数器H

一7500透射电镜日本三洋公司日本OlymPus公司上海医用恒温设备厂美国

强生公司北京恒大建海科贸公司众成机电技术公司日本日立公司LL3主要

试剂解聚复肾宁(J开SN)由黄茂、黄答、葛根、川芍、丹参、当归、黄连

、姜黄等13味中药制备而成，原药购自重庆桐君阁药房，符合国家药典标

准，经重庆医科大学中医药学院中药教研室鉴定并制备成浓缩口服液，含

生药29/nil。链脉佐菌素美国Sigma公司厄贝沙坦杭州赛诺菲安万特民生

制药有限公司抗TNF一a、MCP一1兔多克隆抗体武汉博士德公司免疫组化即

用型SABC试剂盒(H抗)武汉博士德公司DAB显色剂北京中杉金桥有限公司TN

F一a放免试剂盒北京普尔伟业生物有限公司

1.2方法主要试剂

1.2．l配制方法

(l)0.IM构椽酸一构椽酸钠缓冲液(pH4.2):l)准确称取构椽酸(C6HsO

7一HZO)21.0149，加入双蒸水至1000ml，配成

0.1mol/l溶液;构椽酸钠(Na3H5o7.HZO)29.4119，加双蒸水1000ml配成0.l

moFI溶3)取54.onil0.lmol/l构椽酸溶液，

46.0ml0.lmol/l构椽酸钠溶液混匀即可。(2)10%水合氯醛配制109水合氯

醛溶于looml的蒸馏水中即成。

(3)4%多聚甲醛溶液:40gPFA溶于装有50Oml蒸馏水容器内，持续加热

至60一65℃，制备成乳白色悬液，用NaOH(IM)调PH值至7.0，溶液呈清亮

状;再加入约50OnilZxPBS，充分混匀，再次测定PH值，过滤后定容至

1ooomL，4℃保存备用。

(4)o.olM，pH7.4磷酸盐缓冲液(pBS)配制

:NaHZpO4.2HZO0.899，N处HPO4.12H208.79，

NaCI22.89，加蒸馏水300Oml，pH试纸测定PH值7.4。

(5)伊红染液:伊红1.09，蒸馏水99nil。

(6)多聚赖氨酸溶液的配制取多聚赖氨酸原液5ml，加蒸馏水40nil，

配制成1:8的多聚赖氨酸溶液，即可用于处理载玻片。

(7)0.50，0高碘酸:高碘酸0.59，加蒸馏水至loonil，40e保存备用

。

(8)0.5%偏重亚硫酸钠:偏重亚硫酸钠0.59，加蒸馏水至looml，40c

保存备用。

(9)schiff液的配制:碱性品红lg，IN盐酸20nil，偏重亚硫酸钠lg，

蒸馏水200ml。将Zooml蒸馏水煮沸，冷却至900c，加入碱性品