DB22_T2263-2015_大豆抗灰斑病鉴定技术规程_吉林省.docx

ICS65.020.01

DB22

B05

吉林省地方标准

DB22/T2263—2015

大豆抗灰斑病鉴定技术规程

Ruleforevaluationofsoybeanresistancetograyleafspot

吉林省质量技术监督局

发布

DB22/T2263—2015

前

言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由吉林省农业委员会提出并归口。

本标准起草单位：吉林省农业科学院。

本标准主要起草人：董志敏、刘佳、张伟、王丽、陈亮、衣志刚。

I

DB22/T2263—2015

大豆抗灰斑病鉴定技术规程

1

范围

本标准规定了人工控制条件下，大豆抗灰斑病鉴定活体接种法技术中涉及的病原物接种体制备、基

础设施、人工接种、田间管理和抗性调查与评价。

本标准适用于大豆灰斑病抗性鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T1248玉米抗病虫性鉴定技术规范

NY/T1857黄瓜主要病害抗病性鉴定技术规程

NY/T1858番茄主要病害抗病性鉴定技术规程

3

术语和定义

evaluationofresistance

致病性pathogenicity

1

DB22/T2263—2015

培养基

medium

自然或人工配制的、可以使病原体在其生长和繁殖的基质。

3.6

接种体inoculum

用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。

[NY/T1857.1-2010，定义2.7]

3.7

3.8

人工接种

artificialinoculation

在人工控制条件下，将接种体置于植物体适当部位并使之发病的过程。

接种悬浮液

inoculumsuspension

用于接种的含有定量接种体的液体

[NY/T1857.3-2010，定义2.10]

3.9

病情级别diseaseratingscale

定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。

[NY/T1248.1-2006，定义2.5]

用于鉴定和区分特定病原物的生理小种/致病型/株系的一套带有不同抗性基因的寄主品种、品系或

大豆灰斑病grayleafspotinsoybean

大豆灰斑病由大豆尾孢菌CercosporasojinaHara所引起大豆真菌性病害，又称斑点病、斑疹病、

衡量植物病斑大小和多少的数值。

2

DB22/T2263—2015

4.1病原物生理小种的选择

选择经权威部门纯化和鉴定的大豆尾孢菌单个或多个生理小种。

4.2培养基的制备

4.2.1马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）

将200g马铃薯去皮切碎，文火煮30min，滤出残渣，加入20g琼脂粉和20g葡萄糖，溶解后，补

水至1000mL，每管分装5ml，121℃高压灭菌40min，摆斜面，冷却备用。

4.2.2高粱粒培养基

挑选大小均匀、饱满的高粱粒，清洗后浸泡一夜，文火煮40min～60min后，达到透而不烂，沥净

水，装入250mL三角瓶中，装入量150mL左右，121℃高压灭菌60min，冷却备用。

4.3病原菌的繁殖

4.3.1一级菌

大豆灰斑病菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂试管斜面培养基，22℃～25℃暗培养7d～10d，待菌丝布

满斜面培养基，停止培养，选取无杂菌的试管作为一级菌。在扩繁二级菌前，将之短暂保存于4℃冰箱，

时间不可过长，以7d内为宜。同时，将生长较均匀铺满斜面培养基的试管，置4℃冰箱保存，作为以

后接种的初级菌源。每3个至6个月转管培养1次，保持菌的活性。

4.3.2二级菌

一级菌接种于高粱粒三角瓶培养基，22℃～25℃暗培养30d～40d。待菌丝浸透高粱粒，高粱粒

变黑时，停止培养。在发孢前，将之短暂保存于4℃冰箱，时间不可过长，以7d内为宜。

4.4产孢及接种悬浮液制备

4.4.1产孢

将高粱粒二级菌摊铺于无菌的洁净瓷盘中，用灭过菌的潮湿纱布铺盖高粱粒表面，保持相对湿度

60%～90%，或在80%相对湿度的人工培养箱内培养，22℃～25℃暗培养30h～48h，镜检确认产生大

量分生孢子。

清水淘洗高粱粒，分生孢子浓度调至1×10个/mL～1×10个/mL，即10（目镜）×10（物镜）视野

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——抗性鉴定池，选择地势较高地块，建设半地下式鉴定池。鉴定池深1m，宽4m、长6m，有

排水设施，有条件的可以设置喷灌设施；