抗肿瘤的生物技术药物.ppt

B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤BBB瘤瘤瘤HAT选择培养液（黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶）选择培养骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶而死亡检测到所需的X抗体分离单个细胞进行克隆化培养检测到所需的X抗体注入小鼠腹腔扩大培养体外培养大量单克隆抗体DCAB鼠单抗人单抗大鼠小鼠产量高、操作比小鼠麻烦少用易操作、多用HAMA反应人人杂交瘤人B细胞、骨髓瘤细胞融合人鼠杂交瘤人B细胞、鼠骨髓瘤细胞融合细胞杂交瘤技术单克隆抗体的不足：目前单克隆抗体均是鼠源性抗体，应用于人体内可产生人抗鼠抗体（humanantimouseantibody,HAMA)人体的排斥反应人体内半衰期只有5-6小时到达靶组织的药量仅有1％基因工程抗体鼠单抗100%鼠源鼠/人嵌合单抗(66-75%人源)人源化单抗(90-95%人源)100%人源为了降低免疫原性，降低相对分子量，增加穿透力，开发了新的基因工程抗体。恒定区人源化可变区人源化Pr鼠VH人CHPr鼠VL人CL免疫球蛋白基因载体的构建H链嵌合载体L链嵌合载体共转染细胞启动子人-鼠嵌合抗体基因工程改造策略鼠VH01鼠VL02人CL03人CH04抗体分泌细胞05CDR序列CDR序列鼠单克隆抗体人抗体人源化抗体CDR移植小分子抗体与抗原结合活性相对较弱。半衰期短。小分子抗体的缺点：小分子抗体的优点：分子质量小，免疫原性低。易于进入实体瘤周围的微循环。无Fc片段，不易与具有Fc受体的非靶细胞结合，用于免疫诊断时成像清晰。构建较简单，易于操作和改造。可在细菌中表达，易于大量生产。抗体库抗体库技术：用基因克隆技术克隆全套抗体的重链和轻链的可变区基因，然后重组到特定的表达载体中，转化特定的宿主细胞表达有功能的抗体分子，并通过亲和筛选获得特异性抗体可变区基因的技术。利用抗体库技术筛选到的抗体可变区基因可被用于构建基因工程抗体。0102噬菌体抗体库01越过了细胞融合的步骤，省时省力。02扩大了筛选容量，易于获得高亲和力抗体。03不需进行人工体内免疫。抗体库的优点：商品名：赫赛汀英文名：Herceptin通用名：注射用曲妥珠单抗(Trastuzumab)针对HER2的特异性单克隆抗体，用于治疗HER2过度表达的转移性乳腺癌重组DNA衍生的人源化单克隆抗体可单药使用,不良反应轻，耐受性好,可在门诊治疗疗效显著，中位缓解时间长HER2人类表皮生长因子受体-2HumanEpidermalgrowthFactorReceptor-2分子量185kDa的糖蛋白:细胞外区（配体结合区）跨膜区（传导信号）细胞内区（激酶活性）HER2细胞内细胞外细胞膜基因转录提高细胞运动抑制凋亡细胞生长和增殖转移化疗耐药肿瘤生长EGFEGFREGFRTGF?TGF?EGFRHER2HER2HER3NRGNRGHER2HER4HER2HER2信号级联放大核膜1=-基因拷贝数2=-mRNA转录3=-细胞表面受体蛋白表达4=-细胞外受体功能域释放A=HER2DNAB=HER2信使RNAC=HER2受体蛋白细胞核细胞质细胞膜1234CBAHER2阳性：过度表达/扩增HER2正常表达细胞(HER2–)(~2万个受体）HER2过表达的细胞(HER2+)(100–200万个受体）正常HER2表达HER2基因扩增导致HER2过表达HER2过表达导致肿瘤增殖促进细胞的生长和增殖------肿瘤发生抑制细胞的凋亡诱导血管新生提高细胞运动能力,增强肿瘤的浸润转移作用0403010230％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等。20％－30％的原发性浸润性乳腺癌有HER2基因的扩增/过度表达。Herceptin即为一种针对HER2受体的人源化单克隆抗体，是乳腺癌治疗领域的第一个分子靶向性药物，具有高效、低毒、选择性强的特点。2010年，欧洲和美国先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃食管交界癌患者。HER2在癌症中过表达