食品安全标准 食品中维生素B的测定.docx

中华人民共和国国家标准

犌B5009．285—2022

食品安全国家标准

食品中维生素B12的测定

2022-06-30发布

2022-12-30实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局

发布

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犌B5009．285—2022

前言

本标准代替GB5413．14—2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定》。

本标准与GB5413．14—2010相比，主要变化如下：

—增加了第一法液相色谱法；

—增加了第二法液相色谱-质谱法；

—删除了规范性引用文件；

—修改了原微生物法为第三法。

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食品安全国家标准

食品中维生素B12的测定

1范围

本标准规定了食品中维生素B12的测定方法。

第一法液相色谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品中维生素B12的测定。

第二法液相色谱-质谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品、即食谷物、烘焙食品、果冻、饮料中维生素B12的测定。

第三法微生物法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品中维生素B12的测定。

第一法液相色谱法

2原理

试样经酶解后，用氰化钾(或氰化钠)溶液将钴胺素异构体(羟钴胺素、甲钴胺素和5-脱氧腺苷钴胺素等)转化为氰钴胺素。样液通过免疫亲和柱净化、浓缩后，反相液相色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。

3试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB／T6682规定的一级水。

3．1试剂

3．1．1无水乙酸钠(CH3COONa)。

3．1．2乙酸(CH3COOH)。

3．1．3甲醇(CH3OH)：色谱级。

3．1．4乙腈(CH3CN)：色谱级。

3．1．5三氟乙酸(CF3COOH)：色谱级。

3．1．6氰化钾或氰化钠(KCN／NaCN)。

3．1．7胃蛋白酶(CAS号：9001-75-6，活力≥400U／mg)。

3．1．8淀粉酶(活力≥50U／mg)。

3．1．9乙醇(C2H6O)。

3．2试剂配制

3．2．1乙醇溶液(25％)：量取250mL乙醇，加水稀释至1000mL，混匀。

3．2．2乙酸钠缓冲液(0．25mol／L)：称取20．5g无水乙酸钠，用950mL水溶解并用乙酸调pH至4．0±0．1，用水稀释至1000mL。

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3．2．3氰化钾(或氰化钠)溶液(10mg／mL)：称取1．0g氰化钾(或氰化钠)固体，加适量水溶解，并用水稀释至100mL。

注：氰化钾(或氰化钠)为剧毒化学品；操作者须带防护用具，在通风橱内进行氰化钾(或氰化钠)溶液的配制或

使用。

3．2．4三氟乙酸溶液(0．04％，体积比)：量取500mL水，加入200μL三氟乙酸，混匀。3．3标准品

维生素B12(氰钴胺素)标准品(C63H88CoN14O14P，CAS号：68-19-9)：纯度≥99％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

3．4标准溶液配制

3．4．1维生素B12标准储备液(1mg／mL)：称取10mg(精确至0．01mg)维生素B12标准品于50mL烧杯中，用乙醇溶液溶解后，转移至10mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，摇匀，转移至棕色试剂瓶，于－20℃下避光保存，有效期6个月。

3．4．2维生素B12标准工作液(10μg／mL)：吸取1．00mL维生素B12标准储备液，置于100mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度。转移至棕色试剂瓶中，于4℃下避光保存，有效期1个月。

3．4．3维生素B12标准系列工作溶液：准确吸取标准工作液30μL、60μL、90μL、150μL和200μL，分别置于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。其浓度分别为：30ng／mL、60ng／mL、90ng／mL、150ng／mL和200ng／mL。临用现配。

3．5材料

3．5．1维生素B12免疫亲和柱，柱容量≥800ng，柱回收率≥85％(验证方法参见附录A)。3．5．2玻璃纤