配子与胚胎冷冻保存、胚胎移植、性别控制课件.ppt

FSH＋CIDR＋PG法牛超排 发情周期任意一天埋置CIDR 10d后取出CIDR，埋入第二个CIDR（为第0d） 第5d 早FSH 晚FSH 第6d 早FSH 晚FSH 第7d 早FSH 晚FSH 第8d早 FSH＋PGF2α（取出CIDR，注PGF2α ） 晚FSH 24～48h发情，配种或输精（为第0d） 第6～7d冲洗子宫，获桑椹胚～早期囊胚 *澳大利亚产FSH总剂量306mg；日本产FSH24AU（量递减） PMSG法牛超数排卵 PGF2α消除黄体 发情第16～17d，注射PMSG1500～3000IU 隔日注射 hCG1000～1500IU 24～48h发情，配种或输精（为第0d） 第6～7d冲洗子宫，获得桑椹胚～早期囊胚 PMSG法牛超数排卵 发情周期第11～13d，注射PMSG（5IU/Kg体重） 48和60h后分别注射PGF2α（2～4ml）一次 24～48h发情，配种或输精（为第0d） 第6～7d冲洗子宫，获得桑椹胚～早期囊胚 同时注射抗PMSG FSH＋PG法羊超数排卵 早 FSH（国产，7.5mg/瓶） 晚FSH 早 FSH 晚FSH 早 FSH + PGF2α2ml 晚FSH 24～48h发情，配种或输精两次（为第0d） 发情周期第12～13d（绵羊）、16～18d（山羊） 第6d冲洗子宫，获得 桑椹胚～早期囊胚 同时静脉注射LH100～150IU *国产FSH总量为150～300IU FSH＋CIDR法羊超数排卵 发情周期任意1d阴道埋置CIDR （为第1d） 第10d换第二个CIDR 第16、17、18d 早FSH 晚FSH 第19d早 FSH（取出CIDR） 晚FSH 24～48h发情，配种或输精（为第0d） 第6d冲洗子宫，获桑椹胚～早期囊胚 第4d注射progcstin *进口FSH经产羊总剂量7.04mg/只，育成羊5.28mg/只，等量注射 PMSG法羊超数排卵 发情周期的 12～13d（绵羊）、 第16～18d（山羊）注射PMSG800～1500IU 24～48h发情，配种或输精（为第0d） 同时注射hCG500～750IU 第6d冲洗子宫，获得桑椹胚～早期囊胚 牛非手术法收集胚胎示意图 空气 冲洗液 回收洗液 不同发育阶段的正常牛胚胎 发情后天数 发育阶段 桑椹胚~早期囊胚 性别决定与控制 性别决定原理 性别鉴定技术 性别控制技术 哺乳动物性别控制原理 染色体性别决定：Y染色体决定雄性 18世纪90年代，半翅目，精细胞观察，一半精细胞多一段染色体。 1902年，Maclung提出模型：性别是由这一附加染色体决定的。这样，性别也就在受精时由精子的染色体决定了。 1906年，Wilson称这条染色体为X染色体，以后又在无X染色体的精母细胞中发现了一条更小的附加染色体，定名为Y染色体。 1959年，人和小鼠中发现了Y染色体与雄性决定相关。 1966年，Y染色体短臂与雄性发育相关。 在Y染色体短臂上寻找TDF（Testis-determining factor），通过遗传、生物化学、分子生物学，尤其是对突变体的分析和研究，使TDF的搜索范围越来越小。 1989年，Palmer发现四位XX男性，拥有35-40kb的Y染色体特异性片段，将这一特异性片段经数次重叠克隆酶切，制成了50个0.5-1.0kb的小探针，分别与人、牛、小鼠等Y特异DNA进行杂交，其中一个探针杂交成功，位于假常染色体区边缘5kb处，命名为Y-染色体性别决定区（sex-determining region of Y chromosome, SRY）。 SRY基因在不同物种之间高度保守 SRY就是TDF SRY表达与睾丸分化相关。 SRY转基因小鼠（XX）表现为雄性发育和性行为。 XY女性的SRY突变分析。 哺乳动物性别鉴定技术 1、性染色体分析鉴定胚胎性别(核型分析) 2、X-连接酶法鉴定胚胎性别 （X染色体失活之前，XX胚胎的X-连接酶表达量是XY胚胎的二倍，如葡萄糖-6-磷酸脱氢酶或次黄嘌呤磷酸核糖转移酶） 3、H-Y