[实用参考]waters-e2695高效液相色谱.ppt

FD数据处理： 点“处理方法向导”图标→新建处理方法→在新方法（方法类型中选LC）→新建处理方法→峰1、峰2→积分区域（选定要积分的峰）→给出条件剔除不要的峰→→→……→处理方法名→完成（然后又出现主窗口，处理结果自动给出） →至此选好处理方法。 色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram） 色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。 ← 色谱峰 保留时间（分） 基线 ↓ 峰高 峰宽 响应值 色谱图 参数基本概念 色谱峰 － Peak 色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线 峰底 － Peak Base 峰的起点与终点之间连接的直线 峰高 － Peak Height 峰最大值到峰底的距离 峰宽 － Peak Width 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离 半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height 通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离 峰面积 － Peak Area 峰与峰底之间的面积,又称响应值 标准偏差；σ － Standard Error 0.607倍峰高处所对应峰宽的一半 拖尾峰 － Tailing Peak 后沿较前沿平缓的不对称峰 前伸峰 － Leading Peak 前沿较后沿平缓的不对称峰 鬼峰 － Ghost Peak 并非由试样所产生的峰；亦称假峰 色谱图 参数基本概念 基线 － Baseline 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线 基线飘移 － Baseline Drift 基线随时间定向的缓慢变化 基线噪声；N － Baseline Noise 由各种因素所引起的基线波动 谱带扩展 － Band Broadening 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象 色谱图 参数基本概念 死时间，t0 － Dead time 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间 保留时间，tR － Retention time 组分从进样到出现峰最大值所需的时间 死体积，V0 － Dead volume 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的流动相体积 保留体积，VR － Retention volume 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积 色谱图 参数基本概念 在结果中，选择图谱点打印，报告打印时，选择设定好的报告模式，或者选择 “缺醒单个报告”模式打印，在待打印的模式下可以编辑报告显示的信息，比如表头，色谱图的显示范围，表格中所需内容等。 报告打印 关 机 数据采集完毕后，关闭检测器电源开关，以节省使用寿命。 使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫，确保 2695 分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源开关。 处理数据并打印报告后，关闭计算机和打印机电源开关，并做使用登记。 HPLC使用常见注意事项 1.夏季气温高，水容易生菌，要求HPLC所用重蒸水必须每天都要更新。 2.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。高低流速交替冲洗。 3. 配制的流动相使用前要脱气，常用超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min，此法效果一般，但比较方便。 4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用甲醇水溶液冲洗。 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水冲洗及保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时，流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。8.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的 流动相中。 9.关机前先用水冲洗整个系统，移走缓冲液后再用有机相冲洗。 10.进样前检查色谱系统的各个接头是否有漏液。 Thank you ！ 主讲人：马贵红 日期：2010-07-17 高效液相色谱仪操作方法 Waters e2695 型 什么是高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography 高效液相色谱法，简称：HPLC 是一种基于仪器方法的高效能分离手段： 高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度的检测器…… 广泛应用于各个领域： 医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业…… 在技术，理论及应用上仍处于发展阶段 定量分析主要基于与标准品的比较 是其最大应用领域 定性分析；不是色谱的强项 基于样品的保留时间比较 借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器 对定量及定性分析的要求 灵敏度、精度及准确度的要求 样品量的要求；复杂样品的