腺病毒载体在肿瘤治疗中的应.ppt

第三代腺病毒载体*通过对无感染能力的腺病毒颗粒的观察,发现无感染能力腺病毒颗粒的基因组都含有腺病毒基因组左端的一段序列即包装信号。因此设想保留两端TR(TerminalRepeats)及包装信号共约500bp的顺式作用元件,去除腺病毒基因组中全部编码序列(反式作用元件),其它功能由辅助病毒提供,这样的腺病毒载体就是第三代腺病毒载体即所谓空壳载体（gutlessadenovirus）。腺病毒载体在肿瘤治疗中的策略条件增殖腺病毒条件增殖腺病毒*通过基因工程的方法使病毒特异性地在肿瘤细胞中复制来杀死并裂解肿瘤细胞，从中释放出来的病毒又可以进一步感染周围的肿瘤细胞，这类病毒被称为条件增殖腺病毒（conditionallyreplicativeadenovirus,CRADs）或溶瘤腺病毒（Oncolyticadenovirus）。CRADs的分类*改变病毒的基因使其可以在肿瘤细胞中复制，而在正常细胞中复制能力降低，称为I型CRADs。E1B基因dl1520(美国ONYX公司)－5型腺病毒，缺失了E1B区编码55kd蛋白的序列，该蛋白可通过结合细胞内的p53使其功能受到阻滞。头颈部肿瘤和卵巢癌的治疗进入一期和二期临床试验。E1A基因与细胞周期调控蛋白Rb结合，克服其对细胞周期的抑制作用，使细胞周期由G1期过渡到S期，病毒大量复制腺病毒突变株Ad5-Δ24和dl922-947的E1A基因在第2个保守区（CR2）缺失24个碱基，*因此从基因水平调控细胞的基因表达过程理应成为治疗肿瘤的理想手段。*非病毒载体系统，病毒载体系统。优秀精品课件文档资料*条件增殖腺病毒在肿瘤

治疗中的策略条件增殖腺病毒在肿瘤

治疗中的策略微生物教研室李晓霞*内容基因治疗分类主要病毒载体系统腺病毒载体在肿瘤治疗中的策略条件增殖腺病毒现状及策略基因治疗及分类基因治疗*Gene-targetedtherapy，以基因为靶点的治疗，将遗传物质导入人体组织或细胞所进行的疾病的治疗历史与回顾*1980年有人提出用磷酸钙介导基因转移来治疗地中海贫血。离体基因治疗exvivo0180年代初建立逆转录病毒体系为基因治疗提供高效率的转移载体。021989年5月22日Rosenberg首次将外源基因-新霉素抗性基因用逆转录病毒导入肿瘤浸润淋巴细胞中。03历史与回顾*Anderson于1990年9月4日第一次用于人类疾病的基因治疗，两例由于腺苷脱氨酶缺失导致的免疫缺陷的女孩经逆转录病毒载体将该酶基因导入骨髓而获救，并且存活至今。2004年1月，深圳赛百诺基因技术有限公司将世界上第一个基因治疗产品重组人p53抗癌注射液(商品名：今又生)正式推向市场，这是全球基因治疗产业化发展的里程碑根据给药途径和方法基因治疗分类*离体基因治疗exvivo原位基因治疗insitu体内基因治疗invivo030102基因治疗分类*离体基因治疗exvivo—将目的基因在体外导入自体或异体来源的肿瘤细胞或其它细胞，再将这些修饰过的靶细胞转入体内。原位基因治疗insitu—将目的基因载体直接注射或导入体内的肿瘤组织，进行局部治疗，这也是最主要的方法。体内基因治疗invivo—将目的基因载体注射到血液系统进行全身治疗。根据基因导入的方法基因治疗分类*01裸露DNA直接注射－注射genegun02脂质体共转化－体外细胞转化03受体介导的基因导入－病毒载体主要病毒载体系统常用的病毒载体的特点*腺病毒*因该病毒最初来自腺体，故命名为腺病毒(Adenovirus)。根据宿主可分鸟腺病毒属和哺乳类腺病毒。目前，把人腺病毒的46个血清型分为A-F6个组：A-E组：各型病毒均能在人的组织细胞(如肾细胞)常规培养中增殖，称为普通腺病毒；F组（40和41型）：是从粪便中发现，用常规细胞培养不能增殖的腺病毒，称为肠道腺病毒。腺病毒*基因治疗中常用的基因载体01C亚群:2型及5型腺病毒02增殖能力非常强，滴度通常可以达到109pfu03遗传背景和生化结构清楚04球形，无包膜，直径70-80nm。二十面体病毒壳体腺病毒*壳体含有三种主要的蛋白：六邻体（II），五邻体基底（III）和纤突（IV），还有多种其他的辅助蛋白VI，VIII，IX，IIIa和Iva2六邻体五邻体基质纤突蛋白纤突结构域－CAR(coxsackieadenovirusreceptor)五邻体基质中精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸基序（Arg-Gly-Asp,RG