【2017年整理】细菌的形态学检查.doc

PAGE PAGE 1 怀化医专《微生物学检验》 教案 编号：3 2009年下学期 授课教师 李争鸣 教研室主任审核签名 李争鸣 教学课题 细菌的形态 学检查 课时 授课时间 月 日 月 日 月 日 月 日 9月 月 日 2 星期 星期 星期 星期 星期五 星期 授课对象 检验 专业 班级 1～6 目的要求 【掌握】1、细菌染色的一般程序。 2、革兰染色和抗酸染色的原理、方法、结果、应用。 【熟悉】1、显微镜的种类、原理、应用。 2、细菌染色常用的染料，常用的细菌染色方法。 3、细菌的不染色标本检查法。 【了解】细菌的特殊染色方法。 教学重点及难点 1、细菌染色的一般程序。 2、革兰染色和抗酸染色的原理、方法、结果、应用。 教法与 学法 讲解，启发式教学 课型 理论课 教学手段 多媒体 教学 内容 与 时间 分配 显微镜的种类。（20min） 不染色标本检查法。（20min） 染色标本检查法：常用染料、细菌染色程序、常用的细菌染色法。 革兰染色法（35min） 抗酸染色法（10 min） 小 结 （10min） 复习 思考题 细菌的形态学检查有何意义？ 细菌在相同条件下染色，为什么有的染成紫色，有的染成红色？ 参考资料 1、张卓然主编 《临床微生物学与微生物检验》人卫出版社 第3版 2006.11 2、倪语星主编 《临床微生物学与检验》 人卫生出版社 第4版， 2007年 3、李凡主编 《医学微生物学》（本科） 人卫出版社 第7版 2008.1 自评 本次课做到重点讲解清楚，难点分析透彻，部分内容由于实践性较强，需在实验课上再作详细介绍，如：革兰染色的操作步骤。 第八章 细菌形态学检查 形态学检查的目的： ①从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别的基础； ②了解被检标本中有无细菌； ③直接从标本中观察到某些细菌，可对少数疾病初步诊断（如结核，脑膜炎等）。 第一节 显微镜（microscope） 一、普通光学显微镜 原理 自然光的波长为0.4um；显微镜的最大分辨率为0.2um（前者的一半）；肉眼的分辨率为0.2mm，故放大1000倍，使0.2um放大到0.2mm。 二、暗视野显微镜 用暗视野聚光器，使反光镜反射过来的光线不能进入镜筒，视野变暗， 线从暗视野聚光器周围斜射到菌体上，由于散射作用使菌体发光。 常用于活的微生物的动力检测。 三、相差显微镜 在检查不染色标本时，由于细菌的折光性与周围环境的折光性相近，对比不明显，看不清细菌及其内部结构，相差显微镜利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明暗对比。 应用于活菌的形态及某些内部结构的观察。 四、荧光显微镜 以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光短，故分辨率比普通显微镜要高。细菌经过荧光素染色后，在荧光显微镜下，由于菌体各种结构对荧光素的溶解、吸附情况不同，因此发出不同色调和亮度的荧光。 五、电子显微镜 以强大的电子流代替光源，因电子流的波长仅为0.005nm，（仅为可见光源的几万分之一），故其放大倍数可达10万-100万倍，可看清1nm的物体。 电镜种类 透射电镜：因电子的透射作用，可观察细菌，virus内部结构，通过荧屏显示。 扫描电镜：因电子流对物体的表面进行扫描，可清楚的显露出物体的三维空间的立体结构，可用于对细菌，virus的表面结构观察。 第二节 不染色细菌标本检查法 仅用于细菌动力的观察。不能观察细菌的形态和结构特征。 1.压滴法 明视野法、暗视野法。 2.悬滴法 3.毛细管法：孔径0.5-1.0mm，长约60-70mm毛细管，以此管轻取细菌培养物，待液体进入后，两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。 注意：区别细菌的运动与布朗运动。 第三节 细菌染色标本的检查 适于观察细菌的形态和某些结构。 一、染料： 大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。 色 基：即连接在苯环上带双键的有色化学基团，它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深。 如-NO2(硝基）\ -N=N-（偶氮基） 助色基：不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和性，且有酸、碱之分，决定了染料的酸碱性： -NH2（碱性） -OH （酸性） 常用染料种类： 1、碱性染料：美兰，结晶紫，碱性复红等，常以氯化物形式存在，色基带正电，易与带负电的被染物结合着色。由于细菌PI低（2～5），因此常带负电荷，易与该类染料结合。 2、酸性染料：伊红，酸性复红，刚果红，色基带负电。细菌带负电荷不易着色，常用于细胞浆染色，