粒细胞吞噬功能实验。MicrosoftOfficePowerPoint演示文稿.ppt

临床免疫学实验指导 海南医学院 检验医学院 吴荣泉实验七中性粒细胞吞噬功能测定 具有吞噬能力的细胞： 主要为中性粒细胞，单核，组织巨噬细胞也有吞噬。 【实验原理】：当颗粒性物质进入机体后（如细菌， 细胞等）具有吞噬功能的细胞可吞噬这些颗粒性物质，通过测定细胞的吞噬率、吞噬指数来了解吞噬细胞 的吞噬功能. 【实验目的】 掌握中性粒细胞吞噬功能测定的原理和操作方法 【实验目的】 掌握中性粒细胞吞噬功能测定的原理和方法 【实验原理】 将中性粒细胞与细菌等颗粒性异物混合孵育 一定时间后推片染色，于油镜下观察100-200 个细胞吞噬细菌的情况，计算吞噬率和吞噬 指数。 【实验材料】 1.消毒与毛细血管采血用品：采血针，消毒剂 (40ul肝素微量吸管) 2.肝素抗凝管：内含25U/ml肝素20ul 3.葡萄球菌菌液（6×108/ml） （2.4×109/ml，静脉血1.0ml） 死菌液放4℃冰箱备用 4.显微镜，玻片，推片，瑞氏或瑞-吉式染色液， 37℃温箱等 操作步骤 采血：用40ul肝素微量吸管采血40ul 加入0.5ml的EP管内。 向血中加白葡菌液（6×108/ml）20ul，混匀 放37℃温箱孵育30min，每隔10min轻摇1次。 可用静脉血1.0ml，肝素抗凝，加入菌液0.2ml，混匀，温育。 3. 制片：吸取血标本1小滴，推制成血涂片，待干。 4. 瑞氏染色：加A液数滴固定1分钟，再加入B液染色液 5-10滴，5-10min，冲洗，待干。 镜下计数：在油镜下计数200个中性粒细胞，分别 记录吞噬细菌的细胞数和200个细胞吞噬的细菌总数。 计算吞噬率和吞噬指数 （计数200个细胞） 参考值：吞噬率：＞50% ； 62%—76% 吞噬指数：接近1或大于1；1.32-1.72 吞噬率= 200个粒细胞中吞噬细菌的细胞数 200 ×100％ 200个中性粒细胞吞噬细菌的总数 吞噬指数= 200 中性粒细胞吞噬时，可见细胞核与被吞噬的细菌均染成紫色，而细胞浆则为淡红色。 结果判断 1. 所用器材要洁净、无油污。 2. 白色葡萄球菌悬液中若含有10%的小牛血清，可提高吞噬率和吞噬指数。 3. 吞噬细菌的中性粒细胞往往在血片的尾部较多，因此计数时应取血片的前、中、后三段计数，以减少实验误差。 注意事项 实验报告与思考题 报告实验结果，（吞噬率。吞噬指数） 简述中性粒细胞吞噬功能测定原理和 临床意义