猪传染病诊断技术进展要点.ppt

猪传染病诊断技术进展 何启盖 教授 华中农业大学动物医学院 武汉，430070 诊断的意义 明确所发生的疾病 种类：传染性因素：细菌、病毒、支原体、其它微生物； 非传染性因素 单纯感染 /混合感染 是否为人兽共患病 利于制定及时合理的控制方案 诊断的方法与手段 流行病学方法 病理组织观察 血清学检测 病原学检测 分子生物学检测 抗体检测方法－血清学 凝集性反应 沉淀性反应 标记抗体技术 有补体参与的反应 中和反应 检测的目的 免疫状况评估： 定性或定量测定免疫抗体水平 诊断疾病： 区分疫苗免疫动物和自然感染动物； 常用的诊断方法 快速诊断：适用于个体诊断 平板凝集试验：鸡白痢，布氏杆菌 乳胶凝集试验： 免疫胶体金技术 大量样品筛选： 酶联免疫吸附试验（ELISA） 平板凝集试验 培养的菌体灭活后直接与血清混合，观察是否出现凝集颗粒，判定阴阳性。 乳胶颗粒（不同直径大小） 乳胶凝集试验 病毒或蛋白致敏乳胶颗粒，制备成诊断抗原 现场圈舍旁边检测抗体，主要是检测IgM，使用于感染早期诊断 伪狂犬病 细小病毒 乙型脑炎 禽流感胶体金检测技术 酶联免疫吸附试验 将病毒、纯化的蛋白质等抗原包被在酶联板上，通过间接法、竞争法等程序检测抗体。 用途： 免疫抗体检测：伪狂犬病抗体检测（Idexx gB-ELISA, PrV-ELISA, gB-gD ELISA) 区分免疫与感染的ELISA试剂盒 伪狂犬病鉴别诊断方法 传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxIV-ELISA  近年来分子生物学与微电子学等多学科交叉融合而成的一项高新技术，用来快速、准确、高通量地检测目的基因; SH-3D 杂交(病毒检测)结果 在PCR仪中热稳定的DNA聚合酶可使短链的双股靶DNA很快地复制成千上万倍，可以使DNA数量急剧增长而达到检测极限。 理论上，可在2小时内将一个DNA分子扩增到106-109倍，从而大大提高了对其进行分析研究的速度。 用途： 单独感染 多病原混合感染 胸膜肺炎－副猪嗜血杆菌－巴氏杆菌－支原体混合感染 伪狂犬病－细小病毒－圆环病毒感染 猪瘟－蓝耳病－乙型脑炎病毒感染 使用的动物种类： 小鼠：大肠杆菌分离菌株的毒力测定 家兔： 伪狂犬病人工感染；链球菌病感染模型 本动物： * * www.hull.ac.uk/scg/binks/Desforges%20project.htm /Default.aspx?tabid=65 /.../COURSES/NANO/renzo/nano2.html /.../modules.asp?testID=11 通用型：检测所有血清型的禽流感病毒； 血清型鉴定：区分不同血清型，如H5, H7, H9 ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????  抗原捕获酶联免疫吸附试验－适用于大规模样本病毒抗原的筛选 肉品中伪狂犬病毒临床样本检测结果 /companynews.htm Betsy Pierson 发展高通量的检测技术基因芯片技术 （DNA microarrays, DNA chips） RPS2 RPS2 RPS2 RPS1 RPS1 RPS1 Hex Hex Hex 3D3 3D3 3D3 3D2 3D2 3D2 3D1 3D1 3D1 3B2 3B2 3B2 3B1 3B1 3B1 2A 2A 2A 12 12 12 11 11 11 10 10 10 9 9 9 8 8 8 7 7 7 6 6 6 5 5 5 4 4 4 3 3 3 2 2 2 1 1 1 RPS2 RPS2 RPS2 RPS1 RPS1 RPS1 Hex Hex Hex RPS2 RPS2 RPS2 RPS1 RPS1 RPS1 Hex Hex