细胞迁移和侵袭实验技术.pptx

肿瘤细胞运动实验技术;;; 实验原理 细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后在加入药物等实验条件下观察其对肿瘤细胞迁移的影响。;操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;注意事项;实验原理 趋化运动是指细胞能够感受到外界化学物质的浓度梯度，并沿着浓度梯度的方向所做的定向运动。趋化运动是一个非常保守的过程，对于生物体的生存、生命的繁衍等具有重要的意义。;微孔小室中的趋化实验;Boyden Chamber 装置;实验步骤;??验步骤;实验步骤;注意事项;肿瘤细胞侵袭试验 ;原理; 滤膜孔径一般为8mm，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel 的滤膜，这与体内情况较为相似。;实验步骤及注意事项;3. 每孔加入 200ml 1640（或DMEM）培养基使胶重构； 4. 在 Transwell 下室中加入趋化因子或10%FBS 培养基600ml/孔； 5. 在上室孔中准确加入细胞 l×105 个/孔，细胞悬液体积200ml，置于5%CO2 培养箱于37°C 培养24h（注意：细胞量和时间根据实验条件摸索）； 6. 待培养时间结束后，弃去上室液体，小心取出上室，用湿棉签擦去膜上未穿过膜的细胞；;7. 4%中性甲醛固定10 分钟，Giemsa 染色10 分钟，PBS 洗涤3 次，干燥，取下微孔滤膜，倒置显微镜下直接观察穿过膜的细胞(200×)； 8. 每张膜中央部分和周围部分各随机取 3 个视野，计数每个视野内的穿过8mm微孔的细胞数。 ;实验结果举例