高效液相色谱操作手册.doc

转 HP1100高效液相色谱使用说明书 注意事项: 1使用前，应申明样品名称和特性以及使用的流动相。 2更换色谱柱应由中级仪器实验室完成。 3溶剂必须经微孔滤膜过滤，所有废弃物(溶液等)请带走自行处理。 4不得在计算机上进行与实验无关的操作。 5注意适时更换废液收集瓶，防止废液溢出。　 6认真登记实验记录。 7相关论文发表后，应送一份复印件给中级仪器实验室。 北京大学化学学院中级仪器实验室 一、概述 HPLC1100系统构成如下： 1 流动相A B C D 2 真空脱气装置 3、6、9、11 电缆 4 输液泵 5 自动进样器（无） 7 柱温箱 8 检测器（DAD） 10 数据接收处理控制系统（计算机） 12 打印机 13 手动进样器 指示灯状态 每个部件接通电源后，LED灯显示绿色； 黄色 Not Ready 绿色 Run 红色 Error 四元泵系统的工作原理图 柱温箱的特征 可以在低于室温10℃至80℃间恒温 空间大，可以容纳三根30cm长的柱子 安装柱识别可以记录进样次数 两个单独的加热区 可以程序升温 检测器　 HP1100高效液相色谱仪配置的单光路二极管阵列检测器的光路如下所示： 光源发出的复合光经消除色差透镜系统聚焦后，照射到流通池上，透射光经全息凹面衍射光栅色散后，投射到一个由1024个二极管组成的二极管阵列上而被检测。此光路系统中光闸是唯一的运动部件，它有三个动作位置：（1）光闸将入射光束全部遮挡，以进行暗电流补偿；（2）将氧化钬滤光片插入光路，对衍射后的波长进行精确校正；（3）打开光闸使入射光通过样品流通池照在光栅上。 HP1100系统所有控制和操作基本在计算机上完成，熟悉软件十分重要。本系统操作是基于Windows NT的多窗口多任务操作系统，要注意窗口之间可能覆盖。 根据所选色谱柱的性能，本系统可用于分子量小于2000的各种化合物的分离分析。目前中级仪器实验室仅备有ODS反相柱（可用于弱极性化合物及弱离子型化合物的分析）。一般要求自备色谱柱。自备色谱柱应使用HP系列接口，大连化物所及天津Autoscience公司可提供，一般分析柱的价格在1600－2000元之间，HP进口柱价格在4000元人民币左右。 本系统可提供多达四元体系的各种梯度淋洗，但在选择溶剂时须十分小心。流动相选择对分离分析有着重要的影响。 二、开机 打开各部分电源，脱气装置、输液泵、柱温控制、检测器的指示灯变黄。 开启计算机，若有选项，选择开启Windows NT4.0。点START－PROGRAM－HPChemStation－Instl online，计算机开始与仪器联接，并打开各控制界面，此时，各单元指示灯变绿，在工具条的View中选择界面为Runcontrol。 在第一个小窗口中利用下拉菜单，选择显示界面为Method and Run Control； 在第二个小窗口中选择已设定的使用方法（若是旧用户则有记录），新用户先编辑实验方法，然后选工具栏中Method－Save Method As（具体见后）。 第三个小窗口中显示LC操作条件。 三、样品分析 溶剂的处理和设置 不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的性能。遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命： 使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌 用滤膜过滤溶剂去除微生物 每二天更换或过滤溶剂 避免溶剂瓶直接日照 各洗脱液应分别过滤，注意有机相和水相应使用不同的滤膜。 避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂： 卤化物碱金属溶液和相应的酸溶剂 高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸 能够形成卤素自由基或酸的卤化物试剂及其混合物 含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂过滤吸收氧化物 在有机溶剂中的有机酸溶剂 含有强络合剂的溶液 四氯化碳和异丙醇或THF混合物 溶剂的设置： 在输液泵图标上按鼠标左键，在出现的小菜单中选Setup Pump，在Solvents栏中输入A、B、C、D溶剂名称；点溶剂瓶图标，在Solvent Bottles Filling中输入A、B、C、D各溶剂的实际体积数。点OK确定并退出。 设置泵的参数 点输液泵图标，选Setup Pump，出现流速控制界面。设定流速flow rate（一般ODS柱为1ml/min）；设定A、B、C、D各溶剂比例，其中B、C、D可设置。OK。 点输液泵图标，选pump control，点ON打开泵，OK，泵即开始工作，图标亦变为绿色。泵压一般不要超过150bar。 若要设置各种淋洗变换程序如梯度洗脱，点输液泵图标，在此界面下面的空栏