血凝与血凝抑制试验概要.pptx

血凝与血凝抑制试验 2016.05.01 1.了解做试验的目的； 2.试验器材与试剂； 3.血凝试验的原理； 4.血凝抑制试验原理； 5.血凝试验的操作方法；（红细胞的配制） 6.血凝抑制的操作方法；（四单位的配制） 7.掌握试验的结果的判定。 血凝试验与血凝抑制实验目的： 用已知抗原来检测被检血清中有无相应的特异性抗体和滴定该特异性抗体的水平。 实验器材： 微量移液器 ○普通离心机 微量振荡器 禽用采血器 96孔v型血凝反应板 试验主要试剂： 新城疫标准抗原、阳性血清、阴性血清与待检血清 1%鸡红细胞悬液 四单位抗原 生理盐水 抗凝剂 血凝试验原理： 二、血凝试验（HA)实验原理 一些病毒表面有血凝素，能使鸡、鹅或人的红细胞发生凝集，叫做血凝试验。 + 四、血凝试验操作步骤 (1)先做标记；(2)按表中顺序加样。 倒加 血凝试验操作步骤： 1%红细胞的配制： 1.为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好选择采取3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。（抗凝剂与血液比例为1:4） 2.采血完毕后将血加入至10ml离心管中，加3-4倍体积生理盐水以2000~3000r/min，5~10min离心3-5次。 3.弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。 4.吸取压积红细胞泥与生理盐水以1:99进行配制1%鸡红细胞悬液。 5.在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。 6.制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。 (血凝抑制试验（HI)原理 病毒的悬液中加入特异性抗体，红细胞的凝集现 象被抑制，称为红细胞的血凝抑制。 ？ + 血凝抑制试验操作步骤： 五、血凝抑制试验操作步骤 4单位抗原的制备： 根据血凝试验测定的标准抗原的血凝效价，判定4个血凝单位的稀释倍数。 方法举例为：如病毒HA效价为8log2，其4个血凝单位为6log2，则病毒稀释64倍即可。 根据样品数确定所需抗原量做稀释。 血凝抑制试验结果判定： 以完全抑制红细胞凝集的血清最大稀释度为该血清的HI滴度（注：看结果时96孔板倾斜45度）。 注意：确定度数的孔要与前一孔的流速及形状完全一样，即泪珠样流挂。读数要快，可以读到结束，一组（一板）时间不要超过30秒。