SNT 2497.6-2010进出口危险化学品安全试验方法 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.6—2010进出口危险化学品安全试验方法第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验Test method of import and export dangerous chemicals-Part 6 : In vitro sister chromatid exchange assay in mammalian cells2010-03-02发布2010-09-16实施中华人民共和国线351070157发布数码防“国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2497.62010前 創言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：-第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验；第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型遥繁殖试验；第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：睾丸细胞UDS试验；第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；第8部分：胭窝淋巴结试验；第9部分：血清溶血素测定试验;第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；-第18部分：DNA加合物的检测方法；第19部分：Northern Blot实验；第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验;第22部分:DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；一第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497的第6部分。本部分修改采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试指南NO.479《哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换(SCE)体外试验》,其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按GB/T1.1-2000做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：李宁涛、王利兵、陈练、于艳军、于智睿、李学洋。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。T SN/T 2497.6—2010进出口危险化学品安全试验方法第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验1范围SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换（SCE)体外试验的试验仪器、试验原理、试验方法和试验结果。本部分适用于进出口危险化学品导致的染色体同源位点上DNA复制产物互换频率的改变，检测危险化学品对细胞在S期受损伤的程度。2规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T2497的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些女件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。OECD 479哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换(SCE)体外试验3术语和定义OECD 479确立的以及下列术语和定义适用于本部分3. 1 sister thromatid exchange姐妹染色单体互换染色体同源座位上DNA复制产物的相互交换;其频率与DNA的断裂和修复有关。4　原理在分裂的细胞中，每条染色体由两条染色单体组成，每条染色单体由双链DNA组成。当溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)作为核苷酸前体取代胸腺嘧啶核苷后，可参人到DNA新复制的核苷酸链中去。经两次复制后，两条姐妹染色单体的DNA双链在化学组成上就有差别。一条由单股含有BrdU核苷酸链的DNA所组成，而另一条单体则由双股都含有 BrdU核苷酸的 DNA 所组成。用 Hoechst 33258染色时，前者着色深，后者着色浅。当两个等位染色单体间发生交换时，可根据每条染色单体内夹着深浅不同的染色片段而被识别。5仪器和试剂含 BrdU 的培养基；秋水仙素或秋水仙胺；-0.25%胰蛋白酶溶液;2XSSC液（即0.3 mol/L氯化钠和0.003mol/L柠檬酸三钠）;-3%吉姆萨液（pH6.8磷酸缓冲液稀释）；-培养箱。 SN/T 2497.6—20106　试验方法6.1试验细胞准备6.1.1初级培养物(如人淋巴细胞)或已建立的细胞系(如中国仓鼠卵或肺细胞)均可用于本试验。试验前应检查所用细胞是否被