6、化学发光技术在艾滋病诊断中的应用研究[精].ppt

化学发光技术在艾滋病诊断中的应用研究 贾向阳 威高集团国家级技术中心 案例 湖南省武警总队 协和医院老干部体检 ---------现有酶免技术普遍存在较高的假阳性及假 阴性缺陷 艾滋病实验室诊断技术分类 病毒培养 免疫学检测 核酸检测 CD4检测 诊断试剂的临床评价指标 灵敏度（sensitivity) 特异度（specificity) 阴性预期值（NPV） 阳性预期值（PPV） 重复性（reproducibility) 准确性（accuracy) 精确性（precision) 常见诊断方法缺点分析 细胞培养 不会出现假阳性 敏感性差，需P3实验室 P24抗原检测 易出现假阳性 常见诊断方法缺点分析 酶免抗体检测 易出假阳性，相对化学发光和时间分辨荧光免疫分析技术等更先进的分析方法，它的灵敏度比较低。 抗原抗体联检 敏感度低，且易出假阳性 PCR检测 HIV基因的多样性，引物覆盖的局限性 HIV诊断试剂发展方向 提高检测的敏感性、特异性，缩短窗口期，简便、快速和降低成本已成为HIV检测技术发展的方向。 影响免疫诊断试剂敏感度和特异性的关建要素 抗原抗体的活性、纯度及构像 酶标记物的效能 信号放大的效率 试剂盒反应体系的优劣 生产工艺的先进性 化学发光HIV诊断试剂提高灵敏度的技术策略 抗原改进 化学发光HIV诊断试剂提高灵敏度的技术策略 抗原改进 1、构像抗原代替线性抗原以增加流行病学敏 感度。 2、重组抗原结合肽抗原，以增加分析敏感度 化学发光HIV诊断试剂提高灵敏度的技术策略 标记物改进 长臂柔性，空间位阻 光子技术代替吸光度 极高的信号敏感 反应体系正交优化 pH、离子强度、温度、粘稠度 全自动恒低温包被技术 化学发光HIV诊断试剂提高特异性的技术策略 peptide代替BSA封闭 基于超敏的信号放大，降低P-P效应 基于高信噪比，适当提高阈值 包被板冷干燥工艺 CLIA和ELISA对HIV高危样本的检测结果对比----检出率 高危样品中阳性样品S/CO值得分析 阳转血清盘的检测对比 干扰性物质检测结果 国内外HIV试剂可信度对比分析 “灰区”的困惑 可信度分析 国外可信度规定 国内外HIV试剂可信度对比分析 材料方法 1、样品：假阳性；假阴性；220份。 2、试剂：进口发光试剂OT、自制发光试剂 CL、EIA1、EIA2、EIA3。 3、方法：按说明书检测，不一致标本双孔复 试，不一致标本WB。 国内外HIV试剂可信度对比分析 结果 1、220份样本中，真阳性50例，真阴性170例 国内外HIV试剂可信度对比分析 2、假阳性和假阴性S/CO分布 进口发光试剂OT 7份假阳性，其S/CO值均小于4.1;自制发光试剂CL 4份假阳性，其S/CO值均小于3.6;EIA18份假阳性，其S/CO值在1.2~10.2; EIA2 9份假阳性其S/CO值在1.7~20.3 ；EIA3 7份假阳性，其S/CO值在1.8~16。 国内外HIV试剂可信度对比分析 国内外HIV试剂可信度对比分析 假阴性样本S/CO分布 EIA1：0.86 EIA3：0.71; 0.82; 0.14 国内外HIV试剂可信度对比分析 3、结论 （1）不同试剂盒设置不同的灰区标准。 （2）国产三代酶免试剂假阳性S/CO值的分散 性，使得灰区很难界定。 （3）进口和自制发光试剂假阳性S/CO值分别 小于4.1和3.6，便于划定可信度标准， 符合国际规范。 请到美丽威海来 请到美丽威海来 * * * 98.53%(268/272) 100.00%(170/170) 96.08%(98/102) ELISA5 96.32%(262/272) 94.12%(160/170) 100.00%(102/102) ELISA4 97.43%(265/272) 95.88%(163/170) 100.00%(102/102) ELISA3 98.53%(268/272) 98.82%(168/170) 98.04%（100/102） ELISA2 97.79%(266/272) 97.06%(165/170) 99.02%（101/102） ELISA1 100%（102+170/102+170） 100%（170/170） 100.00%(102/102） CLIA 总符合率 特异度 敏感度 方法