微生物与生化制药4.pdf

微生物与生化制药 （四） 细菌叶酸代谢抑制剂的筛选 大多数微生物不能吸收叶酸类化合物，而动物则以吸收叶 酸为生长所需。 NH2 蝶啶＋ 二氢蝶酸 二氢叶酸 四氢叶酸 COOH 采用抵消法测定叶酸类化合物对药物抑制微生物活性的抵消作 用，抗菌活性被抵消的抗生素可能是叶酸代谢抑制剂。 以耐药机制为依据的筛选方法（β－内酰胺酶） 1.耐药菌株平板法 2. 液体测定法 3. 通过颜色变化来检测β－内酰胺酶抑制剂 4. 肾二肽酶抑制剂的筛选 全细胞筛选（whole cell screening ） 优缺点 优点 缺点 获得的药物对完整菌 筛选所需药量较高， 体具有抑制活性 敏感度较低 可获得代谢后产生毒 无法获得具有微弱抑 性的药物 菌活性的药物 获得的药物可作用在 无法了解药物的作用 细胞内任何一个或多 靶点及机制 个分子上 无细胞筛选（cell-free assay systems ） 优缺点 优点 缺点 筛选所需药量较低，敏 所得药物对完整菌体不一 感度高 定有抑制活性 可获得具有微弱抑菌活 须先确定药物作用靶点并 性的药物 建立活性测定方法 可针对特定药物作用靶 点与机制进行筛选 高通量筛选（high throughput screening ） 高通量药物筛选是近10年来国际药业研究发展过程 中一门新兴技术，它已经被世界各大医药公司广泛 用于药物先导物的筛选。 组成部分 •测试方法的建立 •靶体作用物的高通量筛选 •数据的信息处理系统 筛选模型 •细胞模型 受体（45 ％） •分子模型 酶（28 ％） •其他模型 离子通道（5 ％） 优 势 •灵敏，用量小 •规模大 •速度快 •成本相对较低 •缩短新药开发周期 黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase, XO ）抑制剂 尿酸生成关键酶 与心血管系统的关系 中国药学杂志，2007，42 （3 ）：187－190 实验试剂：黄嘌呤氧化酶（XO ）（蛋白含量、酶活） 缓冲溶液 黄嘌呤；别嘌醇 待筛样品：单体化合物；混合物 仪器：微板测定仪；384孔板 实验方法 每孔含：待筛样品；XO ；黄嘌呤。 先将样品与酶混合，25℃预温15分钟，加入黄嘌 呤反应30分钟后，295 nm测吸光度。 模型对照：反应缓冲液代替样品 阳性对照：别嘌醇代替样品 空白对照：反应缓冲液；黄嘌呤 结果计算