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GPERshRNA表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响的开题报告

题目：GPERshRNA表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响

一、研究背景和意义

血管内皮细胞（vascularendothelialcells，VEC）是血管壁内一种内皮化的上皮细胞，具有调节血管张力、血流及血小板聚集状态等生理功能。VEC增殖异常与多种心血管疾病相关，如动脉粥样硬化、高血压等。因此，研究VEC增殖的调控机制具有一定的临床意义。

G蛋白偶联雌激素受体（Gprotein-coupledestrogenreceptor，GPER）是一种针对雌激素作用的细胞膜受体，已被发现广泛分布于多种组织细胞中。我们之前的研究发现，GPER在VECs中的表达水平与VECs的增殖率呈正相关，暗示GPER可能参与VECs的增殖调控。然而，目前对GPER在VECs中的功能和调控机制仍了解不足。

因此，本研究以GPER作为主要研究对象，通过构建GPERshRNA表达载体，进一步明确GPER在VECs增殖调控中的作用机制，为心血管疾病的预防和治疗提供理论基础。

二、研究内容和方法

1.构建GPERshRNA表达载体

根据GPER基因序列设计并合成三个靶向相应位点的shRNA序列。将shRNA序列克隆进载有EGFP基因的质粒中，构建GPERshRNA表达载体，并通过限制性酶切及测序进行确认。

2.验证GPERshRNA表达载体的干扰效果

使用PCR及Westernblotting方法检测VECs内GPERmRNA及蛋白的表达水平，并对shRNA和对照组进行对比分析，验证GPERshRNA表达载体的干扰效果。

3.研究GPER对VECs增殖的作用

通过MTT、CCK-8及细胞增殖周期分析等方法研究GPER对VECs增殖的作用，并研究GPER对VECs细胞周期的调控机制。

三、研究意义和预期结果

本研究通过构建GPERshRNA表达载体，进一步明确GPER在VECs增殖调控中的作用机制，有望揭示GPER在心血管疾病发生和发展中的作用。预期结果为，GPERshRNA表达载体干扰后可明显抑制VECs增殖，并探讨GPER调控VECs增殖的可能机制，为靶向GPER治疗心血管疾病提供理论依据。