苏云金芽孢杆菌的分离与鉴定.pdf

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri.Sci.2006,34(19):4835-4836,4839 。。·‘ 责任编辑金琼球贵任校对金琼琼 苏云金芽抱杆菌的分离与鉴定 苏旭东，檀建新关，张伟，林扬 啊北农业大学食品科技学院河北保定071001) 摘要 苏云金芽袍杆菌(Bacillusduwin如mis,Bt)自1901年被日本学者发现以来，由于在生物防治中的突出作用，受到世界各国的极大关 注。作为基础性研究，Bt的分离与鉴定在发现新型cry蛋白基因与应用方面起着举足轻重的作用。各国对Bt的研究从最初的被感染宿 主体内分离到土壤资源的发掘，从生物测定到血清型、基因型的划分，以及转墓因产品的问世，均体现出全球农业对高毒力、新型广谱杭 虫Bt的需求。综述了Bt的分离与鉴定方法。 关键词 苏云金芽袍杆菌(Bt);分离;鉴定;PCR 中图分类号 Q936 文献标识码 A 文章编号 0517一6611(2006)19一4835一02 IsolationandIdentificationofBacillusduuingensis SUXu-dongetal(CollegeofFoodScience,HebeiAgriculturalUniversity,Baoding,Hebei071001) Abshaet Duetotheinsecticideproperties,Bacillusdruringiensis(Bt)hasbeenusedconunerriallyinbiologicalcontrolofpestssinceitwasdetected. Becauseofitsimportanceinagriculture,theclassificationandidentificationofBtandcrygenewereimportantfortheinvestigationofdiversityofBtre- 。 ，thescreenofnewBtstrainwithhighornovelinsecticidalactivityandthecloneofnewcrygenepredicting.Inthisreview,theclassificationof Btstrainsandcrygenes,andtheidentificationmethodofcrygeneswerediscussed. Keywords Bacillusdniringiensis(Bt);Isolation;Identification;PCR 苏云金芽抱杆菌(Bt)是一类革兰氏阳性、产芽抱、不同 1.3 弹土分离法 该方法简便，易操作。将土壤样品干燥 亚种可产生不同形状蛋白晶体(Cryprotein)的杆状细菌。其 后研碎，撒在灭菌的滤纸上，使滤纸面上均匀粘上一层样品 晶体蛋白已成为应用最成功、前景最好的生防农药。苏云金 粉末，使粘有样品的一面对着培养皿口，轻弹1一2次，然后 芽抱杆菌广泛分布于昆虫、土壤、仓贮尘埃、污水之中。基于 培养[’]。检出时，由于菌落种类多，数量大，影响目的菌落的 土壤蕴涵着丰富的微生物资源及地域多样性赋予了土壤中 特征识别;另外非目的菌落(芽抱菌菌落和真菌菌落)的存 微生物种类多样性的特点，土壤成为筛选不同种类和基因型 在，给纯化带来难度。 Bt原始菌株的最普遍、最直接的来源。自20世纪80年代以 1.4抗生素选择性筛选[[51抗生素能钝化酶的活性，阻止 来，Bt分离方法力求快速、高效而不断改进并趋于成熟，全世 微生物新陈代谢的某些环节，从而对微生物产生选择性作 界被分离出的Bt数量大大增加，种类繁多。故鉴定Bt类别 用。芽抱杆菌中，由于芽抱衣、皮层致密，通透性差，抗生素 成为一项重要的基础性工作。 不能进入芽抱内部，无法抑制其萌发和生长。不同种、属的 1苏云金芽抱杆菌的分离 芽抱对抗生素有不同的抗性。苏云金芽抱杆菌除与地衣芽 1.1温度筛选 与其他芽抱杆菌相同，苏云金芽抱杆菌的 抱杆菌、短小芽抱杆菌、日本甲虫芽抱杆菌抗性类似外，较其 芽抱由外向内分为芽饱外壁、芽抱衣、皮层、芽抱内壁、原生 他常见芽抱杆菌抗性显