花青素提取实验论文.doc

紫甘蓝中花青素的提取研究 【摘要】 蓝花青素具有很强的抗氧化作用，具有清除体内自由基、过敏、保护胃粘膜等多种功能，引起了国内外学者广泛关注。目前抗变异、抗肿瘤、抗，对花青素的研究主要集中于花青素的提取、分离纯化、热稳定性、抗氧化性及其生理功能等方面。本文主要研究了紫甘蓝花青素的提取工艺;用大孔树脂初步纯化紫甘蓝花青素;对紫甘蓝花青素纯度鉴定。采用“溶剂提取、萃取、树脂纯化、薄层色谱”相结合的方案对紫甘蓝花青素进行了分离纯化。 【关键词】 紫甘蓝 花青素 提取 分离 纯化 1.1引言 花青素作为可使用色素之一，具有多种生物学作用，将广泛用于食品加工、医药保健品、化妆品行业。虽然国内外己开展了一些研究，主要集中在花青素粗品的提取方法的研究方面，而对紫甘蓝花青素的组成及分子结构鉴定、生物学活性、药理作用的研究还很少，还需要大量数据为其进一步开发和利用提供理论依据。 2.1材料与方法 2.1.1实验材料 新鲜紫甘蓝 2.1.2实验方法 溶剂提取、萃取、树脂纯化、薄层色谱 2.2主要仪器、试剂 分析天平、外分光光度计、环水式多用真空泵 、心机 、旋转蒸发仪 、恒温水浴锅 、无水乙醇、甲醇、孔树脂、浓盐酸。 2.3实验方法 2.3.1紫甘蓝色素的提取 取新鲜80G的紫甘蓝叶片于大杯中加入一定的浸提剂，吸取一定体积的浸提液于1 Oml比色管中，用浸提剂稀释至刻度，用浸提剂做空白，测定其对520nm光的吸光度。采用溶剂提取法。称取紫甘蓝80g，用500ml的60%乙醇和1%盐酸混合液进行捣碎浸提8层纱布过滤，4℃条件下静置3h，离心测OD值。 2.3.2紫甘蓝色素的初步纯化 大孔树脂预处理的方法:将待处理的大孔树脂装入柱中，用95%乙醇浸泡24h一用95%乙醇2}4BV冲洗一用去离子水洗至无醇味一5%氢氧化钠溶液2}4BV冲洗树脂柱一水洗至中性一10%乙酸2}4BV冲洗通过树脂柱一水洗至中性，备用。滤液用5倍的纯水稀释，大孔吸附树脂法分离，往吸附柱中先用15%乙醇除杂，再用60%乙醇洗脱收集洗脱液；用四分之一的盐酸在90℃条件下水解1h，再加5倍纯水稀释；大孔吸附树脂再次分离，此时用水除杂，无水乙醇洗脱收集； 2.3.3花青素的浓缩结晶 无水乙醇洗脱液用旋转蒸发仪浓缩，放冰箱中等待是否有结晶 甲醇：盐酸=4:1做展开剂测纯度 3.1 实验结果及讨论 3.1.1浓度计算 紫甘蓝捣碎榨汁后得到深紫色溶液，过滤静置稀释40测得OD值为0.865由曲线可得到花青素含量为1.98mg/ml或 6.94mmol/ml 3.1.2结果讨论 关于天然色素的提取纯化。植物色素的提取方法主要有:酶提取、溶剂浸提、超声辅助提取、微波辅助提取、超临界流体提取。实验选用操作简单、快速的溶剂浸提法，用酸性乙液作为提取剂 提取出来的紫甘蓝花青素是粗品，其中含有大量溶于水和乙的杂质，这些杂质会影响到花青素的稳定性和后续研究工作，需要进行分离纯化。分离纯化的方法有很多，包括色谱分离、沉淀分离、膜分离、结晶、升华等。实验选用广泛应用于纯化花青素的柱层析法。用吸附容量大、吸附速度快、再生处理简单的大孔吸附树脂作为柱填料，两次纯化花青素。 实验过程中有原理性的操作失误，但及时改正后基本没对后来结果产生差的影响，反而对花青素纯度的提高有帮助，算是因祸得福了。 最后实验结晶的提取结果未可知，有待进一步研究。