鄱阳湖土鲶人工繁殖及其胚胎发育情况.doc

鄱阳湖土鲶人工繁殖及其胚胎发育情况 　　摘要：鄱阳湖土鲶（Silirus asotus Linnaeus）是江西省鄱阳湖流域本地鲶鱼（俗称土鲶）。采用人工授精方式进行鄱阳湖土鲶人工繁殖，在18℃～26℃的水温条件下对鄱阳湖土鲶胚胎静止水体中发育过程进行了详细的观察记录，胎发育经过7个时期，从受精卵到孵化出膜约为47 .08小时。并将观察结果与南方大口鲶、瓦氏黄颡鱼静止水体胚胎发育时间进行了比较。对比发现南方大口鲶孵化时间最短，其次为鄱阳湖土鲶，用时最长的为瓦氏黄颡鱼。 　　关键词：鄱阳湖土鲶;人工受精;胚胎发育观察 　　基金项目：江西省科技支撑计划（20121BBF60037）：鄱阳湖土鲶繁养殖关键技术研究 　　中图分类号： S943 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2016.20.024 　　对特定水产品种进行人工繁殖生产是水生资源保护的一种重要手段。通过对鄱阳湖土鲶繁殖生物学开展了相关研究，可以有效保护鄱阳湖土鲶野生种质资源，并向渔业生产部门提供优质苗种。并为今后鄱阳湖土鲶的种质资源保护，选育，与资源合理开发利用等工作的开展提供了必要的基础研究数据。 　　1 材料 　　1.1 亲本来源与培育 　　后备亲本为2015年1月下旬捕捞自鄱阳湖区近西南水域的野生个体，共计472余尾，雄鱼103尾、体重为160克～420克，雌鱼369尾、体重为370克～770克。亲本暂养于1332平主米、水深1.8米土池后进行3个多月强化培育。 　　5月11日，将后备亲本雌雄分离后移至孵化方池。人工催产前先行分辨后备亲本中的雌雄个体，区别后再挑选发育程度好的作为此次试验用亲本。鄱阳湖土鲶雌雄同年发育成熟个体中，雄性个体体型相对偏瘦长，个体较小。鄱阳湖土鲶成熟雄性亲本与雌性亲本在身体外形上易分辨的特征为尾鳍末端的开叉深度以及开叉的个数。雄性亲本尾鳍叉深度较大，长度达到整个尾鳍长度的70%左右，且只有一条尾鳍开叉;而雌性亲本尾鳍开叉深度一般只有30%～50%左右，且在尾鳍部开有多条尾鳍叉。鄱阳湖土鲶通体无鳞片，通过对500组雌雄亲本检测未发现生殖锥星的情况，性成熟阶段的雌雄个体体表为墨褐色，雄性个体在性成熟阶段没有出现明显的生殖色。通过挤压检测雌性鲶鱼腹部，挑选卵巢发育良好腹部膨大的雌性个体，并轻轻挤压泄殖孔，有绿色卵粒被挤出。雄性个体生殖孔红肿凸起，经过挤压可见有少量乳白色精液被挤出。 　　1.2 药物 　　此次试验使用的人工催产药物为：促黄体素释放激素A3（LRH-A3）、 绒毛膜促性腺激素（HCG），0.3%胰蛋白酶脱膜用途， 丁香油混合液（丁香油：酒精=1∶5）。 　　2 方法 　　2.1 人工催产 　　渔用催产剂的使用要依据后备亲本性腺实际发育情况进行选择，此次试验经过观察后备亲本性腺发育情况，选配人工催产剂LRH-A3+HCG这两种催产剂配合使用。催产剂使用前用0.7%生理盐水稀释溶解。采取一针注射法进行肌注。雌鱼注射剂量依据体重选取注射剂量为（LRH-A3 6ug+HCG 500IU）/公斤，雄鱼剂量减半的多个剂量方案实施人工催产。注射部位为胸鳍基部。注射时用干毛巾包裹鱼体以便于顺利完成操作。并将亲本放置与产卵池中网箱内，产卵池内每间隔1小时 冲水10分钟，多次升降水位，对亲本施以环境刺激。 　　2.2 人工授精和孵化 　　对亲本进行人工催产后，采用半湿法进行人工授精获得授精卵，并将授精卵平铺在正方形孵化网布盘上。 　　3 胚胎发育观察流程设计 　　人工授精5分钟后，采集受精卵后使用0.3%胰蛋白酶液浸泡受精卵10分钟后，除去受精卵外层胶膜，并用蒸馏水冲洗。每种孵化方式下每次随机取30粒受精卵进行胚胎发育观察，使用凤凰XTL-165-VT90体式显微镜进行观察，采用凤凰光学显微镜高清摄像头MC-D800U（C）选取胚胎发育期内典型个体进行拍照。胚胎发育分期划分以超过半数被观察样本达到该时期的时间点作为确认时间（殷名称1991）。鄱阳湖土鲶受精卵早期发育快，采取每隔15分钟观察一次，待胚胎进入原肠胚期后，再采用每隔25分钟观察一次。在幼体出膜后，为消除被观察样本胚体扭动对观察记录的不利影响，将被观察样本置于0.01%丁香油混合水溶液中进行麻醉处理。 　　4 试验条件 　　该次试验使用了南昌市农业科学院经过改造后的向塘良种繁殖场。 　　4.1水源和过滤设备 　　水源使用的是南昌第二干渠内水源和辅助配备良种繁殖场内浅表层地下井水。用于试验用水都经过过滤设备并经100目筛绢网过滤后使用。 　　4.2苗种培育池 　　苗种培育池为长度为9米、宽度为7.5米、池深为1.25米的水泥池质育苗池，育苗池池顶部位置布设有进水管路，并且开设有排污口及其排水