蓝莓对肝纤维化大鼠肝脏TGF蓝莓对肝.doc

蓝莓对肝纤维化大鼠肝脏TGF蓝莓对肝 　　摘要： 　　目的 观察蓝莓对大鼠肝纤维化肝组织TGF-B1和MMP-2、TIMP-1mRNA表达的影响，探讨蓝莓对大鼠肝纤维化的预防保护作用机制。 　　方法 SD大鼠随机分为生理盐水对照组（A），模型组（B），蓝莓汁预防组（C），丹芍化纤胶囊预防组（D），蓝莓汁+丹芍化纤胶囊预防组（E），用四氯化碳（CC14）复合因素复制大鼠肝纤维化模型，共8周。测定各组大鼠血清谷氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性；并进行肝组织病理学检查；采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测TGF β1和MMP-2、TIMP-2mRNA的表达 　　结果 与B组比较，各预防组血清ALT及AST均明显降低（P0.05）。与A组比较，B组TGF B 1、TIMP1的表达增加（P0.05），MMP2的表达减少（P0.05）。与B组比较，各预防组的TGF β1、TIMP1的表达均减少（P0.05），而MMP2的表达增加（P0.05）。 　　结论 蓝莓对CC14所致大鼠肝纤维化具有一定的预防保护作用，其机制可能与蓝莓抑制TGF-β1及TIMP-1分子的表达，增加MMP-2的表达有关。 　　关键词：蓝莓；肝纤维化；TGF-β1；MMP-2：TIMP-1 　　肝纤维化（hepatic fibrosis）是机体对慢性肝损伤的一种修复反应，是慢性肝病的共有病理变化。肝纤维化的实质是细胞外基质（extracellularMatrix，ECM）合成与降解失衡，导致ECM在肝内过度沉积所致。在肝内ECM降解中起关键作用的是基质金属蛋白酶（Matrix Mettalloproteinases，MMPs）和天然抑制物金属蛋白组织抑制剂（Tissue inhibitor of Mettalloproteinases，TIMPs）。TIMPs可特异性结合活化型的MMPs，导致后者功能失活。通过动物实验和临床研究，目前已认识到MMPs和TIMPs在肝纤维化中发挥着重要作用。 　　蓝莓属杜鹃花科越桔属，因其富含花青素、多酚类和黄酮类等生物活性物质，具有较强的抗氧化作用。本课题组的前期研究结果显示，蓝莓对四氯化碳（CC14）所致的大鼠急性肝损伤和大鼠肝纤维化有一定的预防作用。本研究旨在观察蓝莓对大鼠肝纤维化组织中TGF β1和MMP2、TIMP1表达的影响，进一步探讨蓝莓预防肝纤维化作用机制。 　　1.材料 　　1.1实验动物 雄性SD大鼠清洁级，体重220±20g，由贵阳医学院动物实验室提供。批号：SCXK（黔）2002-0001。 　　1.2主要药品与试剂 蓝莓（兔眼品种），由贵州省麻江县蓝莓生产基地提供，7月份采摘，-20℃保存，临用时解冻榨汁，2g干果约榨1ml蓝莓汁。丹芍化纤胶囊，胶囊由贵阳制药厂生产（批号。TGF-β1、TIMP1、MMP2引物用Primer Express Soft Ware设计，委托上海捷瑞生物有限公司合成。β-actin引物由美国国家环境卫生科学研究所刘杰博士惠赠。CC14由成都金山化学试剂有限公司生产（批号：070410），胆固醇由北京化学试剂公司生产（批号：060801），SYBRGreen试剂盒由美国Applied Biosystems公司生产（批号，RNA纯化试剂盒由北京天根生化科技有限公司生产（批号：#H6820），反转录试剂盒由加拿大Fermentas MBI公司生产（批号，Trizol由美国Invitrogen公司生产（批号：382739），DEPC、磷酸盐缓冲液（PBs液）、枸橼酸盐缓冲液均由武汉博士德生物工程有限公司（批号：AR0044、AR0030、AK0024）。 　　2.方法 　　2.1分组 45只雄性SD大鼠随机分为5组：生理盐水对照组（A组）、模型组（B组）、蓝莓汁预防组（C组）、丹芍化纤胶囊预防组（D组）、蓝莓汁+丹芍化纤胶囊预防组（E组），每组各9只。 　　2.2模型复制除正常对照组外，其他4组用复合病因刺激制备肝纤维化模型。模型制备首剂为0.4 ml/100g CC14皮下注射，CC14浓度为40%，按2：3比例与花生油配制，每隔4 d注射1次，以后剂量为0.3 ml/100g，同时给予高脂饮食（79.5%玉米粉、20%猪油、0.5%胆固醇），共8周。同期，蓝莓汁预防组用蓝莓汁（1.5 ml//100g）每天灌胃1次。丹芍化纤胶囊预防组用丹芍化纤胶囊（0.1 g/100g）每天灌胃1次。蓝莓汁+丹芍化纤胶囊预防组用蓝莓汁（1.5ml//100g）+丹芍化纤胶囊（0.1g/100g）每天灌胃1次。正常对照组，从饲养即日起，每天予0.9%氯化钠注射液2