藏绵羊肺脏中链球菌的分离鉴定及耐药性分析.docx

ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｉｎｋＣａｎｉｎｅＤｉｓｔｅｍｐｅｒＶｉｒｕｓＬＤ－１Ｓｔｒａｉｎ藏绵羊肺脏中链球菌的分离鉴定及耐药性分析冯旭飞，王志敏，吴禹熹，潘玉琨，党斌，杨发龙（西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都６１００４１）摘要：本试验通过无菌采集西藏地区绵羊肺脏，然后进行细菌分离、纯化及ＰＣＲ鉴定；同时，对分离的链球菌菌株进行药物敏感性研究，以期为生产实践中对该病原的防制提供参考信息。结果显示，纯化所得到的细菌呈革兰氏阳性链球状，经ＰＣＲ、克隆、测序鉴定为链球菌；药敏试验结果显示分离菌株对复方新诺明、恩诺沙星、庆大霉素及四环素等大部分药物敏感。本研究为西藏地区绵羊链球菌病的有效防制提供参考。关键词：绵羊肺脏；链球菌；鉴定；耐药性中图分类号：Ｓ８５２．６１＋１文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－７２３６（２０１４）０４－０２３２－０４链球菌是临床上常见的引起山羊和绵羊肺炎的病原菌之一。羊链球菌病是由致病性链球菌引起的一种热性、急性传染病（张发慧等，２００３），是危害绵羊、山羊养殖业的严重疫病，其临床特征是下颌淋巴结与咽喉肿胀、肺炎、败血症等（王明道等，２０１０；赵风琴等，２００４）。有些链球菌也可感染人，并产生耐药性，威胁着人类的健康生活（Ｋｅｉｔｈ 等，２００８；Ｈａｒｆ－Ｍｏｎｔｅｉｌ等，２００６；Ｏｌｉｖｅｒ等，１９９８）。近年来，随着四川省及周边地区养羊业的快速发展和集约化程度的提高，羊肺炎的流行呈明显上升的趋势。２０１３年笔者通过对四川某屠宰场绵羊的肺脏健康情况进行调查，结果发现来自西藏的绵羊肺炎流行情况较严重，屠宰后有非常明显的肺炎病变现象，为调查引起这些绵羊肺炎的主要病原，本试验对病原进行了细菌分离、鉴定并对分离菌株的耐药性做了初步研究，以期为临床诊断和治疗链球菌引起的疾病提供参考。材料与方法１绵羊源链球菌阳性菌株ＳＷＵＮ６６００材料１．１修回日期：２０１４－０１－２２作者简介：冯旭飞（１９８８—），山西人，硕士，研究方向：动物病原微生物学。通信作者：杨发龙，青海人，博士，副教授，研究方向：动物病原微生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｆａｌｏｎｇ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ；Ｔｅｌ：０２８金项目：四川省科技支撑计划项目（２０１２ＮＺ００２４）。由西南民族大学动物医学实验室分离、鉴定并保存；血平板由西南民族大学动物医学实验室自制；１４份绵羊肺脏采自四川某屠宰场。ＴａｑＤＮＡ聚合酶、ＭａｒｋｅｒⅠ均购自天根生化科技有限公司；琼脂糖购自Ｏｘｏｉｄ公司；蛋白酶Ｋ櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅ＺＨＵＡＮＧＪｉｎ－ｑｉｕ１，３，ＭＥＩＪｉａｎ－ｇｕｏ１，ＷＡＮＧＪｉｎ－ｌｉａｎｇ１，ＺＨＡＮＧＱｉａｎ２，ＳＨＥＮ Ｚｈｉ－ｑｉａｎｇ１，２，ＤＩＮＧＺｈｕａｎｇ３（１．ＳｈａｎｄｏｎｇＢｉｎｚｈｏｕＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆ ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅＡｃａｄｅｍｙ，Ｂｉｎｚｈｏｕ２５６６００，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｈａｎｄｏｎｇＬｖｄｕＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｂｉｎｚｈｏｕ２５６６００，Ｃｈｉｎａ；３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００６２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃａｎｉｎｅｄｉｓｔｅｍｐｅｒｖｉｒｕｓ（ＣＤＶ）ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｐｏｓｉｔｉｖｅｂｙＲＴ－ＰＣＲｆｒｏｍａｓｕｓｐｅｃｔｅｄＣＤＶｉｎｆｅｃｔｅｄ ｍｉｎｋｌｉｖｅｒｔｉｓ－ｓｕｅ．Ｎｏｍｉｎｋｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｆｒｏｍｉｔ．Ｔｈｅｖｉｒｕｓｗａｓｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｔｏ３ｋｉｎｄｓｏｆｃｅｌｌｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｐｒｉｍａｒｙＣＥＦｃｅｌｌｓ，ＶｅｒｏｃｅｌｌｓａｎｄＤＦ１ｃｅｌｌｓｆｏｒｖｉｒｕｓｉｓｏｌａｔｉｏｎ．ＩｔｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＶｅｒｏｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｐａｓｓａｇｅｃｕｌｔｕｒｅｂｙｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇｔｈｅｃｅｌｌｓｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ａｎｄｓｈｏｗｅｄｔｈｅｄｅｗｓｈａｐｅｔｙｐｉｃａｌＣＰＥ．ＴｈｅｉｓｏｌａｔｅｄｖｉｒｕｓｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲ，ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆｔｈｅＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓ，ｓｅｒｕｍｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎｔｅｓｔ，ｉｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｔｅｓｔ，ｖｉｒｕｓｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｙｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｏｔｈｅｒｍｅｔｈ－ｏｄｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＣＤＶｗ