五鹤续断生物碱提取技术研究.doc

五鹤续断生物碱提取技术研究【中图分类号】 R917 【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2011)04－0306－02 【摘要】文章简述了五鹤续断中总生物碱的提取分离工艺。 【主题词】五鹤续断 总生物碱 提取 技术 五鹤续断Dipsacus asper属于川续断科植物，多年生草本，药用部位为其干燥根。五鹤续断经过加工后具有根条粗，无头尾，质柔软，墨绿色（俗称乌梅色）菊花心，气微，味微苦，微甜而涩的品质特色，尤其是”乌梅花心”的特征享誉国内外。五鹤续断的有效成分主要有皂苷、挥发油类、生物碱类、维生素E和蔗糖等，临床上主要用于治疗腰膝酸软、跌打损伤、骨折、腰椎骨质增生、先兆性流产和习惯性流产等症状，它具有补肝益肾、续接筋骨、抗骨质疏松、止血安胎等功效。 生物碱是一类天然含氮有机化合物，是存在于中药中的重要化学成分。五鹤续断中的总生物碱，在临床上可用来治疗先兆性流产和习惯性流产等症状，其作用机理主要为五鹤续断总生物碱能显著抑制子宫平滑肌的自发收缩活动，因此，研究五鹤续断总生物碱的提取分离工艺的工艺优化，既能提高其产品的科技含量，为进一步开展其药用及保健方面的应用开发奠定基础，又能合理开发中药资源，创造较高的经济效益和社会效益。? 一 提取方法 1 采样及样品预处理本研究所用材料均来自恩施州鹤峰县走马镇万寺坪道地药材五鹤续断GAP研究及种植基地，野生续断采自GAP基地周围的环境。采用随机取样的方法，分别取人工种植1年生、2年生、3年生和野生的新鲜植株各10株（其根生长3年以后木质化，不能药用），用无离子水将其根、茎、叶分别洗净，切碎后放在105℃的烘箱里杀青30 min～1 h后，于80℃下烘至恒重，将各样品用粉碎机打磨成粉末，过60目筛，装于试剂瓶中，贴上标签，置于干燥器内贮存备用。 2 仪器及试剂： 仪器植物样品粉碎机，索氏提取器，756MC-紫外分光光度计，PHS-3C酸度计，SHZ-D循环水式真空泵，RE-52型旋转蒸发器，电热恒温干燥箱，电子天平（上海天平仪器厂），水浴锅，低速大容量多管离心机，双重蒸馏水器等。试剂咖啡因，溴甲酚绿，邻苯二甲酸氢钾，无水乙醇，氯仿，乙醚，盐酸，氨水等试剂均为分析纯，所用水为双蒸水。 3 实验方法《中国药典》记载总生物碱含量的测定采用氨水碱化后氯仿提取，本实验在此基础上进行了适当的改进。 1）总生物碱的提取分离采用索氏提取法对五鹤续断中总生物碱进行提取并分离。步骤：准确称取五鹤续断干粉5 g装入索氏提取器中，用90%的无水乙醇100 ml进行提取。加热提取10 h后，将提取物用蒸馏水稀释到200 ml，然后用6 mol/L的盐酸溶液调节其pH值为3～3.5，搅拌均匀后，抽滤，再往所得滤液中加入体积分数为10%的氨水，并调节其pH值至8～9，用氯仿萃取两次，25 ml/次。将所得氯仿萃取液蒸馏后所得的黄色液体即为溶有生物碱的粗品。 将生物碱粗品溶于200 ml蒸馏水中，用6 mol/L HCl溶液调节其pH值为3～3.5，然后用乙醚洗涤两次，10 ml/次，弃去乙醚层，然后在水层中用体积分数10%的氨水调节pH值为10左右。再用氯仿萃取2次，方法同上。所得氯仿液进行蒸馏即可得总生物碱精品，将其定溶为4 ml待测。 2） 总生物碱的测定选用咖啡因作为标准替代品，并制作标准曲线，采用紫外分光光度法进行总生物碱含量的测定。? 二 结果与分析 1 单因素实验 1） 料液比对续断总生物碱提取的影响准确称取五鹤续断干粉5 g，分别用90%的无水乙醇50，75，100，125，150 ml进行索氏提取10 h，来研究料液比对续断总生物碱提取的影响。 2）提取时间对续断总生物碱的影响精密称取五鹤续断干样品5.0 g，用90%的无水乙醇100 ml进行索氏提取，研究提取时间对总生物碱提取率的影响。 分析表明，提取时间的长短与所得到的生物碱总量有很大的关系，索氏提取10 h时其吸光度最大，所得总生物碱量最多，提取效率最高，而10 h后随着提取时间的延长，总生物碱含量降低。因此，应选择提取时间为10 h最佳。 3） pH值对续断总生物碱提取的影响称取续断干粉样品5.0 g，用90%的无水乙醇100 ml进行索氏提取10 h后，将提取物用蒸馏水稀释到200 ml，然后用6 mol/L的盐酸溶液调节其pH值分别为2.0，2.50，3.0，3.5，4.4等，来研究酸碱度对总生物碱提取率的影响。 结果显示，采用紫外分光光度法测定总生物碱的过程中，酸度值对其测定结果也有影响，当pH值为3.03时其吸光度最大，因此，本实验应选择pH=3～3.5。 2 确定五鹤续断中总生物碱提取的最佳工艺用人工种植的3年