临床医学工程实践实验报告.doc

实验一 制备试剂配方 实验目的 通过本次实验，掌握10×TBE Buffer、PBS Buffer、1 M Tris-HCl、10%（W/V）SDS、5 M NaCl、0.5 M EDTA、CTAB/NaCl溶液的配置方法和技术，为后续实验做准备。 实验仪器 仪器名称 规格型号 玻璃棒 \ 胶头滴管 \ 药匙 \ 酸碱试纸 \ SL302型电子天平 30g/0.01g 00455 京电子天平 e=10d Top Pette Single Channel Pipettor 2-20ul、20-200ul、100-1000ul 数显式电热恒温水浴锅 HH.S21-8 纯水仪 Aquelix5 烧杯 50ml、100ml、200ml、500ml 立式压力蒸汽灭菌器 YXQ-LS-50SII 实验试剂 Tris 硼酸 NaCl KCl 浓盐酸 SDS NaOH CATB 试剂配方及操作步骤 试剂 组分溶度 配置量 配制方法 10×TBE Buffer 890 mM Tris-硼酸、20 mM EDTA 200ml 称量Tris 21.6g、 1.488g、硼酸11g置于烧杯中；2、向烧杯中加入约160ml的去离子水，充分搅拌溶解；3、加去离子水将溶液定容至200ml后，室温保存 PBS Buffer (pH7.4) 137 mM NaCl、2.7 mM KCl、10 mM 、2 mM 200ml 1、称量NaCl 1.6g、KCl 0.04g、 0.284g、 0.054g，置于烧杯中；2、向烧杯中加入约160ml的去离子水，充分搅拌溶解；3、滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加去离子水将溶液定容至200ml；4、高温高压灭菌后，室温保存 1 M Tris-HCl（pH 8.0） 1 M Tris-HCl 200ml 1、称量24.22g Tris置于烧杯中；2、加入约160ml的去离子水，充分搅拌溶解；3、加入约8.4ml浓盐酸将溶液调节至pH 8.0；4、将溶液定容至200ml；5、高温高压灭菌后，室温保存 10%（W/V）SDS 10%（W/V）SDS 50ml 1、称量5g高纯度的SDS置于烧杯中，加入约40ml的去离子水，68℃加热溶解；2、将溶液定容至50ml 5 M NaCl 5 M NaCl 200ml 1、称取58.44g NaCl置于烧杯中，加入约160ml的去离子水，搅拌溶解；2、加去离子水将溶液定容至200ml；3、高温高压灭菌后，4℃保存 0.5 M EDTA（pH8.0） 0.5 M EDTA 50ml 称取 9.305g置于烧杯中；2、加入约40ml的去离子水，搅拌溶解；3、用NaOH调节pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解；4、加去离子水将溶液定容至50ml；5、高温高压灭菌 6、室温保存 CTAB/NaCl溶液 2%CATB 50ml 1、称取CATB 1g，NaCl 4.085g，置于烧杯中；2、加入约5ml 1M Tris-HCl（pH8.0）;3、加入约2ml 0.5M EDTA；4、加入17.5ml ，再定容至50ml，高温高压灭菌；5、常温保存 注意事项： 配制溶液时，注意在溶液容器上贴上标签，标签内容包括溶液名称、体积、pH等等； 在完成配置溶液后，将PBS Buffer(pH7.4)、1 M Tris-HCl（pH 8.0）、5 M NaCl、0.5 M EDTA（pH8.0）、CTAB/NaCl溶液置于立式压力蒸汽灭菌器中高温高压灭菌。 实验分析 遇到问题及解决 （1）在配置10×TBE Buffer时，将Tris与Tris盐酸盐搞混，错将Tris盐酸盐拿来配置；在问题及时发现后，我们重新用Tris配置了10×TBE Buffer。 （2）在配置PBS Buffer(pH7.4)时，由于称量误差，PBS Buffer溶液偏酸，已经无法通过浓盐酸滴定到指定pH7.4，我们通过NaOH将pH调节到7.4。 实验误差 仪器本身的系统误差； 读数造成的误差，溶液溶度有区别。 实验心得 本次的实验我有如下几点心得：其一，我们组是与第四小组合作，我们小组配置10×TBE Buffer、PBS Buffer、1 M Tris-HCl、10%（W/V）SDS，第四小组配置5 M NaCl、0.5 M EDTA、CTAB/NaCl溶液，每样溶液各配置两份，通过两组合作减少实验时间，提高实验效率；其二，通过这次实验我简单掌握了生物实验最基础的准备步骤——实验溶液的配比，也简单掌握了基础实验仪器的操作，这一点为我们进一步学习生物医学工程奠定了基础，是我们以后想在生物行业有所发展