临床医学工程实践实验报告.doc
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实验一 制备试剂配方
实验目的
通过本次实验,掌握10×TBE Buffer、PBS Buffer、1 M Tris-HCl、10%(W/V)SDS、5 M NaCl、0.5 M EDTA、CTAB/NaCl溶液的配置方法和技术,为后续实验做准备。
实验仪器
仪器名称 规格型号 玻璃棒 \ 胶头滴管 \ 药匙 \ 酸碱试纸 \ SL302型电子天平 30g/0.01g 00455 京电子天平 e=10d Top Pette Single Channel Pipettor 2-20ul、20-200ul、100-1000ul 数显式电热恒温水浴锅 HH.S21-8 纯水仪 Aquelix5 烧杯 50ml、100ml、200ml、500ml 立式压力蒸汽灭菌器 YXQ-LS-50SII
实验试剂 Tris 硼酸 NaCl KCl 浓盐酸 SDS NaOH CATB
试剂配方及操作步骤
试剂 组分溶度 配置量 配制方法 10×TBE Buffer 890 mM Tris-硼酸、20 mM EDTA 200ml 称量Tris 21.6g、 1.488g、硼酸11g置于烧杯中;2、向烧杯中加入约160ml的去离子水,充分搅拌溶解;3、加去离子水将溶液定容至200ml后,室温保存 PBS Buffer
(pH7.4) 137 mM NaCl、2.7 mM KCl、10 mM 、2 mM 200ml 1、称量NaCl 1.6g、KCl 0.04g、 0.284g、 0.054g,置于烧杯中;2、向烧杯中加入约160ml的去离子水,充分搅拌溶解;3、滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加去离子水将溶液定容至200ml;4、高温高压灭菌后,室温保存 1 M Tris-HCl(pH 8.0) 1 M Tris-HCl 200ml 1、称量24.22g Tris置于烧杯中;2、加入约160ml的去离子水,充分搅拌溶解;3、加入约8.4ml浓盐酸将溶液调节至pH 8.0;4、将溶液定容至200ml;5、高温高压灭菌后,室温保存 10%(W/V)SDS 10%(W/V)SDS 50ml 1、称量5g高纯度的SDS置于烧杯中,加入约40ml的去离子水,68℃加热溶解;2、将溶液定容至50ml 5 M NaCl 5 M NaCl 200ml 1、称取58.44g NaCl置于烧杯中,加入约160ml的去离子水,搅拌溶解;2、加去离子水将溶液定容至200ml;3、高温高压灭菌后,4℃保存 0.5 M EDTA(pH8.0) 0.5 M EDTA 50ml 称取 9.305g置于烧杯中;2、加入约40ml的去离子水,搅拌溶解;3、用NaOH调节pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解;4、加去离子水将溶液定容至50ml;5、高温高压灭菌
6、室温保存 CTAB/NaCl溶液 2%CATB 50ml 1、称取CATB 1g,NaCl 4.085g,置于烧杯中;2、加入约5ml 1M Tris-HCl(pH8.0);3、加入约2ml 0.5M EDTA;4、加入17.5ml ,再定容至50ml,高温高压灭菌;5、常温保存 注意事项:
配制溶液时,注意在溶液容器上贴上标签,标签内容包括溶液名称、体积、pH等等;
在完成配置溶液后,将PBS Buffer(pH7.4)、1 M Tris-HCl(pH 8.0)、5 M NaCl、0.5 M EDTA(pH8.0)、CTAB/NaCl溶液置于立式压力蒸汽灭菌器中高温高压灭菌。
实验分析
遇到问题及解决
(1)在配置10×TBE Buffer时,将Tris与Tris盐酸盐搞混,错将Tris盐酸盐拿来配置;在问题及时发现后,我们重新用Tris配置了10×TBE Buffer。
(2)在配置PBS Buffer(pH7.4)时,由于称量误差,PBS Buffer溶液偏酸,已经无法通过浓盐酸滴定到指定pH7.4,我们通过NaOH将pH调节到7.4。
实验误差
仪器本身的系统误差;
读数造成的误差,溶液溶度有区别。
实验心得
本次的实验我有如下几点心得:其一,我们组是与第四小组合作,我们小组配置10×TBE Buffer、PBS Buffer、1 M Tris-HCl、10%(W/V)SDS,第四小组配置5 M NaCl、0.5 M EDTA、CTAB/NaCl溶液,每样溶液各配置两份,通过两组合作减少实验时间,提高实验效率;其二,通过这次实验我简单掌握了生物实验最基础的准备步骤——实验溶液的配比,也简单掌握了基础实验仪器的操作,这一点为我们进一步学习生物医学工程奠定了基础,是我们以后想在生物行业有所发展
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