化妆品微生物五项检测.PPT

说明： （1）铜绿假单胞菌为专性需氧菌，能产生绿色水溶性色素，所以在SCDLP中生长在液面，培养基成绿色。 （2）氧化酶试验原理：铜绿假单胞菌含有细胞色素氧化酶，该酶是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色（如粉红色或紫红色）的醌类化合物。 （3）绿脓菌素试验原理：铜绿假单胞菌能产生水溶性青脓素和绿脓素，能被氯仿提取；同时能产生红脓素，能溶于盐酸。 （4）硝酸盐还原试验原理：铜绿假单胞菌能还原硝酸盐，并将硝酸盐分解产生氮气。 （5）42℃生长试验原理：致病性铜绿假单胞菌能在42℃条件下生长，同属的荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌都不能生长。 （6）明胶液化试验：铜绿假单胞菌含有胶原蛋白酶，能分解明胶，使其液化。 * 化妆品微生物五项检验 菌落总数（Aerobic bacterial count）：化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和兼性厌氧菌落总数。 菌落总数检验 菌落总数的测定便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。 48小时出结果（30-300）： 测试流程 数据 处理 混合平板的制备 细菌的培养 检查结果、观察与计数 供试液 的制备 书写检验 记录单 为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5％的 TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。 TTC亦不可多加会抑制菌落生长 推荐了解： 人员培训能力掌握的检验重要指标。 有条件可做视具体样品测试结果。 在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱下来,因此,需要验证检测方法的有效性。 接种阳性菌计算回收率 未检出2天，检出3-4天 耐热大肠菌群 Thermotolerant coliform bacteria系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5℃培养24h—48h能发酵乳糖产酸并产气。 该菌主要来自人和温血动物粪便，可作为粪便污染指标来评价化妆品的卫生质量, 推断化妆品中有否污染肠道致病菌的可能。 耐热大肠菌群检验操作流程 产酸：黄色 产气：气泡 产酸产气 书写检验 记录单 不产酸不产气 增菌培养 供试液的制备 配培养基和稀释液 检查结果判断 44.5±0.5℃ 24-48h 分离培养 蛋白胨水培养 最终结果判断 44.5±0.5℃ 24±2h 靛基质 特征菌落 36±1 ℃ 18~24h 双倍胆盐乳糖 EMB琼脂 液面玫瑰红色 紫黑色 ★粪大肠菌群检查流程图 镜检 结果报告 根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出耐热大肠菌群。 未检出2天，检出4天 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在 42℃±1℃条件下能生长。 铜绿假单胞菌检验操作流程 该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。在自然界中分布甚广，空气、水、土壤 最终结果判断 增菌培养 供试液的制备 书写检验 记录单 分离纯化 无菌落或无特征菌落 配培养基和稀释液 革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验 生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明胶液化试验 ★铜绿假单胞菌检查流程图 SCDLP培养基 十六烷三甲基溴化铵琼脂 36±1℃ 18~24h 36±1℃ 18~24h 特征菌落 灰白色、扁平、周围有水溶性蓝绿色素 镜检 十六烷三甲基溴化铵平板 SCDLP培养基 黄绿色菌膜 灰白色湿润 氧化酶试验 粉红/紫红色 绿脓菌素试验 盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色 硝酸盐还原产气试验 N2 明胶液化试验 明胶培养基（高层） 明胶液化 被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。 结果报告 未检出2天，检出3天 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。 金黄色葡萄球菌检验操作流程 该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病