转基因食品安全评价指南.pdf

转基因植物安全评价指南 二〇一〇年十月二十七日 转基因植物安全评价指南 一、总体要求 （一）分子特征 从基因水平、转录水平和翻译水平，考察外源插入片段的整合和 表达情况。 1．表达载体相关资料 （1 ）目的基因与载体构建的物理图谱 详细注明表达载体所有元件名称、位臵和酶切位点。 （2 ）目的基因 详细描述目的基因的供体生物、结构（包括基因中的酶切位点）、 功能和安全性。 供体生物：如Bt 基因cry1A 来源于苏云金芽孢杆菌XX 菌株。 结构：完整的DNA 序列和推导的氨基酸序列。 功能：生物学性状，如抗鳞翅目昆虫。 安全性：从供体生物特性、安全使用历史、基因结构、功能及有 关安全性试验数据等方面综合评价目的基因的安全性。 （3 ）表达载体其他主要元件 启动子：供体生物来源、大小、DNA 序列（或文献）、功能、安 全应用记录。 终止子：供体生物来源、大小、DNA 序列（或文献）、功能、安 2 全应用记录。 标记基因：供体生物来源、大小、DNA 序列（或文献）、功能、 安全应用记录。 报告基因：供体生物来源、大小、DNA 序列（或文献）、功能、 安全应用记录。 其他表达调控序列：来源（如人工合成或供体生物名称）、名称、 大小、DNA 序列（或文献）、功能、安全应用记录。 2．目的基因在植物基因组中的整合情况 采用转化事件特异性PCR 、Southern 杂交等方法，分析外源插入 片段在植物基因组中的整合情况，包括目的基因和标记基因的拷贝 数，标记基因、报告基因或其它调控序列删除情况，整合位点等。 外源插入片段的转化事件特异性PCR 检测：具有片段名称、引 物序列、扩增产物长度、PCR 条件、扩增产物电泳图谱（含图题、分 子量标准、阴性对照、阳性对照、泳道标注）。 外源插入片段的Southern 杂交：采用两种以上限制性内切酶分别 消化植物基因组总 DNA ，获得能明确整合拷贝数的、具有转化事件 特异性的分子杂交图谱。文字描述至少包括探针序列位臵、内切酶名 称、特异性条带的大小、图题、分子量标准、阴性对照、阳性对照、 泳道标注。 外源插入片段的全长DNA 序列：实际插入受体植物基因组的全 长DNA 序列和插入位点的两端边界序列 （大于300bp ）。提供转化事 件特异性PCR 验证时相应引物名称、序列及其扩增产物长度。 3 3．外源插入片段的表达情况 （1 ）转录水平表达（RNA ） 采用Real-time PCR, RT －PCR 或Northern 杂交等方法，分析主 要插入序列（如目的基因、标记基因等）的转录表达情况，包括表达 的主要组织和器官（如根、茎、叶、种子等）。 RT －PCR 检测：引物序列、扩增产物长度、RT-PCR 条件、扩增 产物电泳图谱（含图题、分子量标准、阴性对照、阳性对照、泳道标 注）。 Northern 杂交：探针序列位臵、特异性条带的大小、Northern 杂 交条件、杂交图谱（含图题、分子量标准、阴性对照、阳性对照、泳 道标注）。 （2 ）翻译水平表达（蛋白质） 采用ELISA 或Western 杂交等方法，分析主要插入序列（如目的 基因、标记基因等）的蛋白质表达情况，包括表达的主要组织和器官 （如根、茎、叶、种子等）。 ELISA 检测：描述定量检测的具体方法，包括相关抗体、阴性对 照、阳性对照、光密度测定结果、标准曲线等。 Western 免疫印记：相关抗体名称、特异性蛋白条带的大小、 Western 免疫印记条件、免疫印记图谱（含图题、分子量标准、阴性 对照、阳性对照、泳道标注、样品和阳性对照的加样量）。 （二）遗传稳定性 主要考察转基因植物世代之间目的基因整合与表达情况。 4 1．目的基因整合的稳定性 用Southern 或转化事件特异性PCR 手段检测目的基因在转化体