SN 1169-2002猴沙门氏菌检验操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1169—2002猴沙门氏菌检验操作规程Protocol of examination for salmonella in monkeys2002-11-25发布2003-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1169—2002前言本标准的实验方法是在参考国内、国外实验室的检验规程和总结了多年的实践制定的。本标准的附录A、附录B为规范性附录，附录C为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：董俊、肖荣海、徐维加、周晓黎、赵颜润。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。一 SN/T 1169--2002猴沙门氏菌检验操作规程1范围本标准规定了猴沙门氏菌的检验方法。本标准适用于猴沙门氏菌的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标推的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标推，然而，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4784.4-1994食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.28一1994食品微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T6682---1992分析实验室用水规格和试验方法3设备和器材3.1温箱。3.2 天乎。3.3显微镜。3.4无菌棉拭子。3.5接种环。3. 6载玻片。3.7 试管。3.8 三角烧瓶。3.9 试管架。3. 10酒精灯。3. 11平血。4培养基和试剂4.1(GN肉汤：按GB4789.28-1994中 4.17规定。4.2LSC肉汤：按GB4789.28—1994中4.16规定。4.3甘油缓冲液：见附录 A。4.4Hajna 样品保存液：见附录 A。4.5SS琼脂培养基：按GB4789.28—1994中4.22规定。4.61DHL琼脂培养基：按GB4789.28--1994中14.20规定。4.7亚硫酸铋(BS)琼脂培养基：按GB4789.28一1994中4.19规定。4.8HE琼脂培养基：按GB4789.28—1994中4.21规定。4.9三糖铁(TSI)琼脂培养基：按 GB4789.28--1994中4.26规定。4. 10糖发酵培养基：按GB4789.28-1994中3.2规定。1 SN/T 1169—20024.11氧化酶试剂：按GB4789.28—1994中3.18规定。4.12　革兰氏染色法：按GB4789.28-1994中2.2规定。4.13沙门氏菌诊断血清：出指定单位提供。5 检疫程序见附录 B。6 操作步骤6.1采样、运输和保存6.1.1将灭菌棉拭子用增菌液或生理盐水湿润后直肠采样或采取新鲜粪便，放人GN肉汤和棉拭子直接涂布于选择性平板培养基上。6.1.2样品采集后需延迟送检的，可保存于甘油缓冲液或Haina样品保存液中，保存时间不超过72h。6.2增菌培养将GN肉汤36℃±1℃ 4h～8h 培养后，取1ml.上液加人９ml.SC增菌液中36℃±1℃培养18 h~24 h。6.3选择性分离用SS琼脂和DHL、BS、HE、WS琼脂中任选一种，对上述选择性增菌肉汤液进行划线分离或直接用肛门棉拭子划线分离。于36℃土1℃培养18h～24h。观察各个平板上的菌落形态。沙门氏菌各亚种的菌落形态见表1。表 1沙门氏菌在不同选择性平板上的菌落特征选择性琼脂平板亚属、I、V、V亚属I（即亚利桑那菌）SS 琼脂无色半透明；产硫化氢菌株，有的菌落中心乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与亚属1、Ⅱ、带黑色。不如其他培养基明显NV、V相同乳糖阳性的菌株为粉红色，中心带熙色，但中心无黑色形成时与大肠艾希氏菌不能区别DHL琼脂无色半透明；产硫化氢菌落中心带黑色或几「乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与亚属I、Ⅱ、乎全黑色V、V相同乳糖阳性的荫株为粉红色，中心带熙色HE琼脂蓝绿色或蓝色·多数菌株产硫化氢，菌落中」乳糖阳性的菌株为黄色，中心黑色或几乎全WS琼胎心黑色或几乎全黑色黑色;乳糖迟缓阳性或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色中心黑色或几乎全黑色BS 琼脂产硫化氢菌落为熙色有金属光泽、棕褐色或1黑色有金属光泽灰色。菌落周围培养基可黑色或棕色；有些菌株不产硫化氢，形残灰绿色的菌落，周围培养基不变6.4生化试验6.4.1挑取选择性琼脂平板上的可疑菌落，接种于三糖铁斜面琼脂培养基，一般应挑4个～5个菌落，以防漏检。36℃±1℃培养 18 h～24 h。6.4.2观察三糖铁琼脂培养基的反应，肠杆菌科常见扇种的反应结果见表2。2 SN/T 1169—2002肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果表21斜面底层产气硫化氢可能的菌属和种++/-X沙门