NY_T 2070-2011牛初乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定分光光度法.pdf

ICS 67.100.01X 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2070—2011牛初乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定分光光度法Determination of immunoglobulin G in bovine colostrum andits products--Spectrophotometry2011-09-01 发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2070—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC 274)归口。本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、东北农业大学。本标准主要起草人：邵华、金茂俊、姜瞻梅、金芬、肖航、杨锚、王静、刘宁。 NY/T 2070--2011牛初乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定分光光度法1 范围本标准规定了牛初乳及其制品中免疫球蛋白 IgG的测定方法。本标准适用于牛初乳及其制品中免疫球蛋白 IgG的测定。本方法检出限:0.2 mg/mL。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验用水规格和试验方法3原理试样中可溶性抗原 IgG与抗体形成可溶性免疫复合物，复合物在聚乙二醇作用下自液相析出,形成微粒，使试液浊度发生变化，试液浊度与所含IgG抗原量成正比，在340nm测定免疫球蛋白IgG含量。4试剂与材料除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。实验用水应符合GB/T 6682规定的二级水要求。4. 10. 01 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7. 4)取 0.27g磷酸二氢钾（KH2PO4）,2.86g磷酸氢二钠(NazHPO4·12H2O),0.20 g 氯化钾(KCl)，8.80 g氯化钠(NaCI),水溶解后调 pH至 7.4,用蒸馏水定容至 1000mL,置 4℃保存。4.24%聚乙二醇缓冲液取40g聚乙二醇,加磷酸盐缓冲液（4.1)定容至1000mL,置4℃保存。4.3IgG标准贮备液称取0.010gIgG标准品，精确至0.0001g，用磷酸盐缓冲液（4.1)溶解并定容至10.0mL，摇匀。此标准贮备液质量浓度为1.0mg/mL，置一18℃保存备用。4. 4 IgG 标准系列溶液取IgG标准贮备液，用 4%聚乙二醇缓冲液稀释（4.2），配制浓度为0.20 mg/mL、0.30mg/mL、0.40 mg/mL、0.50 mg/mL、0. 60 mg/mL、0. 70 mg/mL 和0.80 mg/mL 的 IgG标准系列溶液,临用时配制。4.5抗IgG抗体贮备液取10mg兔抗牛IgG抗体粉剂（效价≥10000)溶于2mL的磷酸盐缓冲液（4.1)中，每管分装成100μL,置一18℃保存备用。4.6抗 IgG抗体稀释液取100μL的抗体贮备液，加人4.9mL的聚乙二醇缓冲液（4.2),将抗体稀释50倍。临用时配制。5仪器与设备5.1紫外分光光度计,340nm，配有微量比色皿。5.2微量移液器。 NY/T 2070—20115.3反应管,0.5mL。5.4冷冻离心机。5.5 分析天平,感量0.1 mg和0.01g。5.6恒温水浴锅。6分析步骤6.1试样制备6.1.1液态牛初乳取 2.0mL液态牛初乳试样于离心管中,在1℃～5℃、5000 r/min条件下离心30 min。去上层脂肪,取 1.0mL脱脂牛初乳试样,用 4%聚乙二醇缓冲液（4.2)稀释至 100mL～200mL,混匀,备用。6.1.2　固态牛初乳将固态牛初乳样品粉碎后，称取0.2g试样,精确至0.001g,加2.0mL水，混匀，在1℃～5℃、5000r/min条件下离心30min。去上层脂肪,取1.0mL脱脂牛初乳试样，用4%聚乙二醇缓冲液（4.2)稀释至 50 mL～100 mL,混勾，备用。6.2　测定6.2.1标准曲线的绘制向各个反应管中加入250μL的抗IgG抗体稀释液（4.6），再分别取10μL浓度为0.20mg/mL、0. 30 mg/ mL、0. 40 mg/ mL、0. 50 mg/mL、0. 60 mg/mL、0. 70 mg/mL、0. 80 mg/mL 的 IgG 标准系列溶液（4.4)依次加人各反应管中,混匀后,置于37℃水浴中反应 40 min。以 4%聚乙二醇缓冲液(4.2)进行调零，在340nm波长下测定吸光值，以标准溶液浓度为横坐标、吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。6.2.2试样的测定向各个反应管中加入250μL的抗IgG抗体稀释液（4.6），再取10μL待测试样加入各反应