【2017年整理】15.苗天红-输血前血型血清学检查.pdf.docx

输血前血型血清学检查疑难标本的实验操作及试剂的使用北京市红十字血液中心 血液研究所 血型室 苗天红输血前血型血清学检查 （输血相容性检测）《临床输血技术规范》要求血型鉴定（受血者、献血者的ABO和RhD血型）抗体筛选（受血者意外抗体筛查）交叉配血一 ABO血型ABO 正反定型相符：正反定型相符且正定型反应强度4+； 反定型反应强度≥ 2+。ABO 正反定型不符的定义和范围ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）。ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜ 4+，反定型反应强度＜2+。正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差别 ＞2+以上。正反定型不符? ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）正反定型不符ABO 正反定型相符， 但弱反应，正定型反 应强度＜4+，反定型 反应强度＜2+。正反定型不符正定型为O型，反定型非O 型或Ac、Bc凝集强度差别＞2+以上正反定型不符处理的程序排除仪器设备、试剂、标本及操作失误。查阅、询问病历资料，设 计针对性试验。选择试管法做正反定型。ABO血型鉴定的特殊技术。吸收放散试验唾液型物质检测毛细管离心分离自身和输入红细胞DTT处理自身凝集红细胞分子生物学检测（血型基因）询问、查阅病历试管法正反定型血型鉴定特殊技术观察↓假设↓验证↓解决试管法试管法：血型定型金标准，常用于疑难血型鉴定。可以反复离心看结果。可以延长抗原抗体反应时间，可以改变反应温度（4℃、 37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集 素的干扰。可以观察红细胞混合外观现象。可以观察红细胞溶血现象。试管法正反定型ABO血型定型试剂抗-A1抗-A1 用于检测A亚型。注意：抗-A1反应阴性A亚型A型抗原减弱A型新生儿与抗A1反应阴性或 弱反应抗-H抗-H 用于检测ABO亚型及 孟买、类孟买型。( A或B亚型H抗原增强，孟买、 类孟买H抗原阴性。)注意：血液病致A、B抗原减弱，H抗原 可能出现增强或减弱。必须做对照试验。抗-AB抗-AB 用于鉴定Ax和Bx， 抗-AB与Ax、Bx抗原会产生 较强反应。反定型O细胞 用于确认反定型的 有效性,可以发现ABO系统 以外室温反应性抗体干扰 ABO反定型。自身对照 用于检测是否 存在自身冷抗体干扰ABO反 定型，确认正反定型的有 效性。A2细胞 用于A亚型的鉴定 （A亚型产生抗-A1抗体）。注意：反定型抗-A减弱，可能出 现与A1细胞阳性反应，与 A2细胞反应阴性。规范的摇试管方法试管法凝集强度判读反应强度红细胞凝集情况4+ 一个结实的大凝块，背景清楚3+ 几个大凝块，背景清楚2+ 中等大小凝块，背景清楚1+ 小凝块，背景较混浊w+ 有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊，显微镜下可观察到较多凝 集细胞0 没有可见的细胞凝集，呈均匀的红细胞悬液pH 部分溶血：残留部分红细胞，液体出现透明澄清红色H 完全溶血：未见红细胞，液体出现透明澄清红色mf 混合外观凝集，部分红细胞形成较大凝块，周围是游离的红细胞试管法凝集强度为什么要使用标准凝 集强度：操作标准化。实验结果有回溯性。保证不同实验室、不同工作人员对同一标本实验结果的一致性。吸收放散试验表达弱A和弱B抗原的红细胞直接离心试验中不被抗-A、抗-B所凝集，但可以吸收相应的抗体。可以通过将其吸收 的抗体放散出来，并检测放散出来的抗体，以证明弱A或 弱B抗原的存在。吸收用RBC：盐水洗涤3次的待检压积RBC 1ml。吸收用的抗血清：人源抗-A、抗-B 。将压积RBC和抗血清按等体积比例混合，在4℃孵育至少1小时，期间 每隔15分钟混匀一次。用冷盐水洗涤孵育后的细胞4-6次，得到压积RBC，加入等量盐水。56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。用试剂红细胞检测放散液（人源抗体要做盐水介质和IAT）。注意：一定要用O型红细胞做阴性对照。巯基试剂消除自身凝集红细胞巯基试剂：DTT、2-Me巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷 自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝 集的红细胞。用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等量的 0.01M的DTT，37℃孵育30分钟，将细胞洗涤3遍后配成2-4%的悬液备用。DTT处理自凝红细胞RhD血型被检红细胞与抗-D试剂凝集者为RhD阳性，不凝集 者为RhD阴性。正常的RhD阳性：与IgM抗-D≥3+ 反应强度。红细胞与IgM抗-D反应强度≦2+D变异型自身凝集红细胞抗-D引起的新生儿溶血病。血液病致D抗原减弱直接抗人球蛋白强阳性红细胞D抗原分类D抗原的分类：根据D抗原的数量和表位不同， 将D抗原分为以下3类：正常的D：与IgM抗-D≥3+ 反应强度。D变异型：与IgM抗-D弱反应或阴性，需IgG抗-DIAT才能检出。1.弱D（weak D）2.部分D（partial