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NKG2D介导的同种异体NK细胞对人脑胶质瘤细胞杀伤效应的实验研究的开题报告

一、选题背景和意义

脑胶质瘤是最常见的脑部肿瘤之一，治疗难度大，预后较差，在治疗过程中往往伴随着严重的神经系统功能损害，给患者带来了极大的困扰。目前用于治疗脑胶质瘤的手段主要是手术切除、放疗和化疗，但是这些治疗手段具有一定的局限性，需要寻找新的治疗方法。

天然杀伤(NK)细胞是一类免疫细胞，具有广泛的抗肿瘤和杀伤病毒感染的能力。一项研究表明，在人类脑胶质瘤中，NK细胞的数量和活性都较低。因此，调节和提高NK细胞的活性，增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，有望成为治疗脑胶质瘤的有效手段。

NKG2D是NK细胞表面的一种免疫受体，可以识别广泛分布在多种肿瘤细胞表面的NKG2D配体。因此，利用NKG2D来识别并杀伤肿瘤细胞，是目前一种非常热门的免疫疗法。

本研究将应用同种异体NK细胞与切除脑胶质瘤患者外周血单个核细胞(PBMC)经过处理后的脑胶质瘤细胞株进行体外实验，探究NKG2D对同种异体NK细胞的杀伤效应，为拓展脑胶质瘤治疗手段提供实验基础依据。

二、研究内容和方案

（一）研究内容

本研究旨在探究NKG2D介导的同种异体NK细胞对人脑胶质瘤细胞的杀伤效应。具体内容包括：

1.构建同种异体NK细胞和脑胶质瘤细胞株的体外共培养模型。

2.利用Westernblot等技术检测同种异体NK细胞中NKG2D的表达情况。

3.采用MTT法等细胞生物学方法，探究NKG2D介导的同种异体NK细胞对脑胶质瘤细胞的杀伤效应。

（二）研究方案

1.实验相关的仪器和试剂准备，包括NK细胞培养二氧化碳培养箱、体外细胞培养液、脑胶质瘤细胞株、Westernblot试剂盒、MTT试剂盒等。

2.同种异体NK细胞的筛选，通过检测细胞表面的CD56和CD16等标记物，筛选出约90％的同种异体NK细胞。

3.构建同种异体NK细胞和脑胶质瘤细胞株的体外共培养模型，培养条件为37℃、5%CO2/95%空气、无乳糖RPMI1640培养液。

4.利用Westernblot等技术检测同种异体NK细胞中NKG2D的表达情况，通过特异性抗体（如anti-NKG2Dantibody）实现检测。

5.采用MTT法等细胞生物学方法，探究NKG2D介导的同种异体NK细胞对脑胶质瘤细胞的杀伤效应，比较同种异体NK细胞和脑胶质瘤细胞生长情况。

6.对实验结果进行统计学分析。

三、研究预期结果

1.通过构建体外共培养模型，证明同种异体NK细胞能够识别并杀伤脑胶质瘤细胞株。

2.证实NKG2D介导的同种异体NK细胞对脑胶质瘤细胞株的杀伤作用具有一定的效果，并提供相关的实验数据和观察结果。

3.为后续的体内实验和临床试验提供实验基础依据。

四、研究进度

本研究计划于2022年9月开始，预计2023年9月完成实验，整理数据、论文撰写、答辩及提交论文计划于2023年10月至2024年1月期间完成。