化妆品中甲醛检测方法..doc

附件2 化妆品中甲醛检测方法 1 适用范围 本方法规定了采用柱前衍生化液相色谱-紫外检测法测定化妆品中甲醛（以游离甲醛计）（CAS ：50-00-0）的方法。 本方法适用于化妆品中甲醛含量的测定（以游离甲醛计）。 2 方法提要 甲醛测定采用柱前衍生化法，甲醛与24-二硝基苯肼反应生成黄色的2，4-二硝基苯腙（见图1），经高效液相色谱分离，紫外检测器在355 nm波长下检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对甲醛的检出限为0.01 μg，定量下限为0.052 μg。若取0.2 g样品，本方法对甲醛的检出浓度为0.0005%，最低定量浓度为0.0026%。 图1 甲醛衍生化反应式 3 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。 甲醛标准物质（标示量：10.4 mg/mL）。 2，4-二硝基苯肼，纯度 ≥ 99.0%。 氯仿，色谱纯，含量 ≥ 99.9%。 盐酸(?20 =1.19 g/mL)。 氢氧化钠。 磷酸氢二钠（Na2HPO4?12H2O）。 磷酸二氢钠（NaH2PO4?2H2O）。 乙腈，色谱纯。 甲醇，色谱纯。 3.10 去离子水。 3.11 2，4-二硝基苯肼盐酸溶液：称取2，4-二硝基苯肼（3.2） 0.20 g，置于锥形瓶中，先加浓盐酸（3.4）40 mL使溶解，必要时可超声助溶，再加去离子水（3.10）60 mL，摇匀，即得。 3.12 氢氧化钠溶液[r（NaOH）= 1 mol/L]：称取NaOH（3.5）10 g，加水适量溶解后，转移到250 mL量瓶中，用去离子水（3.10）稀释并定容至刻度，摇匀，即得。 3.13磷酸缓冲溶液（5 mol/L）：精密称定NaH2PO4?2H2O3.7）2.28 g和Na2HPO4?12H2O3.6）12.67 g，加水适量溶解后，转移到100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 3.14 乙腈水溶液（9+1）：量取乙腈（3.8）180 mL，置锥形瓶中，加水20 mL，摇匀，即得。 3.15 空白化妆品样品：选择不含甲醛的化妆品作为空白样品。 3.16 系列浓度甲醛标准溶液：精密量取甲醛标准物质水溶液（3.1）1 mL置于10 mL量瓶中，加乙腈水溶液（3.14）稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为1.04 mg/mL的甲醛储备液，然后按照表1进行标准溶液的配制。 表1 甲醛系列标准溶液配制 工作溶液 溶液初始浓度 量取体积 定容终体积 标准工作溶液终浓度 储备溶液 10.4 mg/mL 1 mL 10 mL 1.04 mg/mL 标准溶液1 1.04 mg/mL 2.5 mL 10 mL 260 μg/mL 标准溶液2 1.04 mg/mL 2 mL 10 mL 208 μg/mL 标准溶液3 1.04 mg/mL 1 mL 10 mL 104 μg/mL 标准溶液4 104 μg/mL 5 mL 10 mL 52.0 μg/mL 标准溶液5 104 μg/mL 1 mL 10 mL 10.4 μg/mL 标准溶液6 10.4 μg/mL 5 mL 10 mL 5.2 μg/mL 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪：具有紫外检测器。 4.2 分析天平：感量0.001 g。 4.3 超声波清洗仪。 4.4 离心机。 5 测定步骤 5.1 样品处理 称取化妆品样品0.2g（精确至0.001 g），置中，加乙腈水溶液（3.14）2 mL，涡旋2 min，使混匀，以5000 rpm转速离心5 min，取上清液1.0 mL置5 mL 离心管中，加水2 mL，涡旋30 s，混匀，准确量取上述样品溶液1 mL置10 mL离心管中，加2，4-二硝基苯肼盐酸溶液3.11）0.4 mL，涡旋1 min，静置2 min，加磷酸缓冲液3.13）0.4 mL，再加氢氧化钠溶液（3.12）2 mL，涡旋10 s，然后加入4 mL 氯仿，涡旋3 min，静置10 min，取氯仿层溶液1.0 mL置离心管中，以5000 rpm转速离心10 min，取上清液，备用。 5.2 色谱条件 色谱柱：C18色谱柱（250 × 4.6 mm，5 μm）； 流动相：甲醇+水（60+40）； 流速：1.0 mL/mi； 柱温：25 ℃； 检测波长：355 nm； 进样体积：10 μL； 运行时间：25 min。 5.3 甲醛标准工作曲线制备 精密量取5.2 μg/mL、10.4 μg/mL、52 μg/mL、104 μg/mL、208 μg/mL、260 μg/mL系列标准工作溶液各1.0 mL置5 mL 离心管中，加水2 mL，涡旋30 s，混匀，然后取上述溶液1.0 mL置10 mL离心管中，加2，4-二硝基苯肼盐酸溶液3