CAP_CTM HBV技术介绍.ppt

CAP/CTM HBV检测介绍 技术指标 Sensitivity (LOD) 12 HBV DNA IU/mL Linear range 54-1.1E8 HBV DNA IU/mL Specificity 100% Subtype inclusivity subtypes A–G Specimen input 1000 μL EDTA plasma (实际需要850 μL) Time to result ~ 5 hours CP与IU的换算系数 1 IU HBV DNA=5.82 Copies 工作原理-Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV病毒颗粒在温浴下裂解，并去除DNA酶 加入裂解液和磁珠的同时各样本加入内对照（QS） 核酸被磁珠表面吸附 溶液进行清洗和洗脱 用荧光定量PCR方法扩增，检测, 采用内部标准法（QS）进行定量 试剂保存--所有试剂2-8℃保存，即拿即用 试剂启用后，可保存28 days； 试剂启用后，在Cobas Ampliprep上累计使用时间最多64 hrs; CTM(-)、L(+)、 H(+)使用后的扔掉； 样本条码2-30℃保存； 洗液2-30℃保存，打开后可使用28 days; Cobas AmpliPrep完成后的混合好的PCR反应体系2小时内必须转移到Cobas TaqMan开始扩增； 需另准备的东西 移液枪和枪头（1000 μL ） 涡轮振荡仪 试管架 无粉手套 样本的运输和保存 全血在2～25 ℃下运输，24hrs内收集出血浆 (800-1600g 20mins at RT)； 血浆可在室温下(25-30 ℃)保存最多3天，在2～8 ℃最多保存7天，或者-20~-80 ℃下长期保存，至少6周； 血浆样本建议1100-1200 μL进行保存； 血浆冷冻时，最多冻融5次，不损失HBV DNA； 结果分析 结果单位表示成IU/ML（5.82Cps/IU) 合理的外部质控结果 阴性： Target Not Detected 弱阳性：具体浓度 强阳性：具体浓度 结果标识 具体浓度，如2.34E+05 IU/mL ——在检测动力学范围内 1.20E+01 IU/mL ——结果可行，只是低于检测范围 1.10E+08 IU/mL ——结果可行，只是高于检测范围 Target Not Detected ——结果可行，低于检测限 结果报告 各种外部质控结果 * NC: LPC HPC * * *