丹参总酚酸抑制酪氨酸酶机理的研究.doc

丹参总酚酸抑制酪氨酸酶机理的研究 　　[摘要]目的：研究丹参总酚酸、总丹参酮对酪氨酸酶的抑制作用机理。方法：采用紫外-可见分光光度法测定490nm处酪氨酸酶催化产生的多巴醌的吸光度，并通过Lineweaver-Burk双倒数作图法计算酪氨酸酶的Km和Vm值，考察丹参总酚酸、总丹参酮对酪氨酸酶的抑制作用及作用机理。结果：酪氨酸酶的Km=0.2067mg?ml-1，Vm=0.0222?min-1，总丹参酮在浓度为2mg?ml-1抑制率为0.00%，丹参总酚酸浓度达到10mg?ml-1后Km变大，Vm变小。结论：总丹参酮对酪氨酸酶无抑制作用；丹参总酚酸对酪氨酸酶具有可逆抑制作用，抑制类型属于混合I型。 　　[关键词]丹参；酪氨酸酶；总丹参酮；总丹酚酸；紫外-可见分光光度法 　　[中图分类号]Q591 R758.4+2 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2015）22-0025-04 　　Abstract： Objective To study the inhibition of Salvia miltiorrhiza total phenolic acid，Total tanshinone on tyrosinase and their mechanism. Methods Using ultraviolet-visible spectrophotometry determines the absorbance of tyrosine enzyme catalysis to produce Dopaquinone at 490nm and calculates the Km，Vm values of tyrosinase through the method of Lineweaver-Burk Plot；Studying the inhibition of Salvia miltiorrhiza total phenolic acid，Total tanshinone on tyrosinase and their mechanism. Results Tyrosinase Km=0.2067mg?ml-1，Vm= 0.0222?min-1，when the concentration of Total tanshinone reaching 2mg?ml-1，the inhibition rate was 0.00%；when the concentration of Salvia miltiorrhiza total phenolic acids reaching 10mg?ml-1；the higher Km become，the lower Vm become. Conclusion Total tanshinone had no effects on tyrosinase，the inhibition of Salvia miltiorrhiza total phenolic acid on tyrosinase was reversible，the Inhibit type belongs to mixed type I. 　　Key words：Salvia miltiorrhiza；tyrosinase；total tanshinone；Salvia miltiorrhiza total phenolic；Ultraviolet-visible spectrophotometry 　　丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈的功效[1]。现代药理研究认为丹参具有保护皮肤，扩张血管、抗血栓形成、改善皮肤微循环、改善皮肤颜色、调节组织修复与抑菌等药理作用[2]，丹参所含的酚酸类成分如丹参素、原儿茶醛等具有抑制酪氨酸酶的活性。丹参的水溶性提取物丹参总酚酸具有独特宜人的天然清香气，是美容护肤用品的理想天然原料。 　　目前临床采用丹参注射液穴位注射配合中药汤剂治疗黄褐斑等色素沉积具有很好的疗效[3]。丹参在复方中使用同样具有良好的美白效果。将含有丹参的中药美白面膜通过超声波导入皮肤，治疗炎症引起的色素沉着，疗效达到90%[4]。美白验方祛斑方中含有丹参，张理梅等发现祛斑方能使黑色素阳性细胞数量明显下降[5]。 　　目前国内外的研究显示，丹参在化妆品中的应用前景良好。但是丹参对酪氨酸酶的抑制作用机理尚无研究。本文通过测定酪氨酸酶的米氏常数Km、最大反应速率Vmax，研究丹参总酚酸对酪氨酸酶的抑制作用机理。 　　1 仪器和材料 　　1.1 仪器 　　Multiskan Mk3型酶标仪（赛默飞世尔仪器有限公