分子流行病学与医院感染控制细菌同源性分析研究在感控中的应用.ppt

分子流行病学与医院感染控制 四川大学华西医院实验医学科 临床微生物实验室 泌尿道感染UTI的临床诊断 在收集泌尿道感染的实验室数据时，需注意：导尿管的尖端培养结果不能作为诊断泌尿道感染的条件。尿培养必须使用适当的无菌技术进行留取，如清洁留取的中段尿液。 细菌同源性研究 －分子生物学方法 DNA指纹技术和核酸序列检测是发展较快的前沿技术，对微生物种群分类、基因结构分析、流行病学研究、院内感染控制均具有较高的实用价值。 Pulsed Field Gel Electrophoresis Multi-Locus Sequencing Typing MLST：选定目的基因组的数个看家基因位点；针对各基因位点设计相应的PCR引物，扩增各目的看家基因片断；扩增产物测定DNA序列；进而给每各基因位点指定相应的等位基因数值；各看家基因位点的等位基因数值共同构成一个等位基因谱，从而命名相应的序列型。 Repetitive PCR 细菌基因组中广泛分布的短重复序列（repetitive sequence），它们在菌株、种、属水平上分布有差异及进化过程有相对保守性。 rep-PCR：即细菌基因组重复序列PCR技术；是扩增细菌基因组中广泛分布的短重复序列，通过电泳条带比较分析，揭示基因组间的差异。 选择何种分型方法应首先由研究的目标决定 短期单中心爆发或病人研究 高分辨率的分型方法，如PFGE 收集病例相关的菌株以及与先证者不相关的菌株 长期多中心研究 首先进行PFGE分型 选择部分菌株进行MLST/rep-PCR分型 注意收集流行病学资料 种群研究 PFGE, MLST, rep-PCR, DNA芯片 本作品采用知识共享署名-非商业性使用 2.5 中国大陆许可协议进行许可。 专业交流 模板超市 设计服务 本作品的提供是以适用知识共享组织的公共许可（ 简称“CCPL” 或 “许可”） 条款为前提的。本作品受著作权法以及其他相关法律的保护。对本作品的使用不得超越本许可授权的范围。 如您行使本许可授予的使用本作品的权利，就表明您接受并同意遵守本许可的条款。在您接受这些条款和规定的前提下，许可人授予您本许可所包括的权利。 查看全部… NordriDesign?中国专业PowerPoint媒体设计与开发 －细菌同源性分析研究在感控中的应用 “谁主张，谁举证” 手术伤口感染 ！ ？ 导管相关血流感染 ！ ？ 呼吸机相关肺炎 ！ ？ 证据！ 临床微生物实验室 院内感染控制部门 分子流行病学 基 础 方 法 目 的 微生物检验学 临床诊断 基 础 病原学诊断 细菌鉴定 分子流行病学方法 细菌分型 表 型 基因型 菌种、药敏 同源性 耐药性 毒力 生物表型 生物基因型 临床微生物实验室 医疗相关感染的病原学多重耐药菌的出现：MRSA、ESBLs、VRE、XDR-Ab、 XDR-Pa 1、是否所有院内感染都要追查病原体？ 2、是否所有的病原体都要检测同源性？ Yes，应尽量寻找病原菌。 No，非常必要时才考虑。 3、病原体同源性分析能提供什么信息？ 1. 病原体同源性； 2. 携带特殊基因 SUTI Symptomatic 有症状的尿道感染 ASB Asymptomatic bacteriuria 无症状的尿道感染 urinary tract infection 发烧（fever）体温高于38℃ 尿急（urgency） 尿频（frequency） 小便困难（dysuria） 耻骨上压痛（suprapubic tenderness） SUTI Symptomatic 有症状的尿道感染 1.UTI症状任1项 and 2.尿培养≥10^5/ml and 3.细菌2种 2008美国CDC/NHSN医院感染诊断标准 ATCG…… 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 ATGCGTT ATGCGTT ATGCGTT GCGAGTA GCGAGTA GCGAGTA ATGC GTT AATATCCG ATGC GTT AATATCCG ATGC GTT AATATCCG 大肠埃希菌 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶 细菌同源性分型基本原理（一） 酶切产物 酶切产物 大肠埃希菌 PCR PCR 细菌同源性分型基本原理（二） PCR产物 PCR产物 DNA/RNA、PCR、sequencing …… PFGE、rep-PCR …… PCR技术 分子生物学技术 的核心与基础 脉冲场凝胶电泳（PFGE） 多位点序列分析（ MLST ） 多位点重复序列分析（rep-PCR） Stain Gel and Visualize Band Patterns A B C D E F G