耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 检测(荧光PCR法).ppt

上海之江生物科技股份有限公司Shanghai ZJ Bio-Tech Co., Ltd. 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 检测（荧光PCR法） 金葡/表葡/腐生 致病性强 耐甲氧西林金葡 葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 MRSA 1. MRSA背景资料——What Is MRSA? 金黄色葡萄球菌致病性 1、金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌 2、可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至严重到败血症、脓毒症等全身感染。 3、 其致病的强弱取决于其产生毒素和侵袭性酶 溶血毒素 杀白细胞素 血浆凝固酶 肠毒素 金葡菌的院内感染 手术切口感染 各种插管感染 下呼吸道感染 尿路感染 胃肠感染 皮肤和软组织感染 血液感染 病人往往抵抗力低下 正常医疗操作可能导致病人的正常免疫屏障受损 接受化疗、激素治疗等治疗容易出现免疫力迅速降低 不合理大量抗生素治疗容易导致菌群失调 医院是病原体相对集中的环境 菌群交叉感染等 SA VS MRSA — 耐药的产生机制 一种特殊蛋白的产生 低亲和力的青霉素结合蛋白PBP2α mecA基因 PBP2α 耐药性 金葡的耐药性 STAPHYLOCOCCI Coagulase Negative Staphylococci S. aureus MSSA MRSA 对于MRSA万古霉素常是治疗的唯一药物，而万古霉素具有很强的副作用，易导致病人出现肝肾问题。同时，万古霉素的使用会诱发耐万古霉素金葡（VRSA）的产生，致使尤其引起的各种感染发展到无药可用的地步。因而在未确定是耐药性金葡感染前需特别注意慎重用药。 近年在南欧部分国家和英国MRSA在金葡菌感染中的检出率在大型医院达到了30％-50％。 在德国，1996-2006年间MRSA的感染率不断增长达到了20％-22％，德国的一所大型教学医院(kath—arinen hospita1)MRSA感染的病例在1994—2003年间上升了277％ 国外 SA院内携带率普查—北京某三甲医院 SA院内现状 SA耐药率现状 MRSA 《多重耐药菌医院感染预防与控制技术 指南（试行）》 2011年国家卫生部出台文件，为了进一步加强多重耐药菌医院感染预防与控制 ，制定了 MRSA 医疗机构应积极开展常见多重耐药菌的监测。对多重耐药菌感染患者或定植高危患者要进行监测，及时采集有关标本送检，开展主动筛查，以及时发现、早期诊断多重耐药菌感染患者和定植患者。 生化鉴定（乳胶凝集） VS PCR快速检测 金葡菌鉴定： 耐药性鉴定： 药敏试验（K-B法） VS PCR快速检测 金葡传统临床鉴定方法 其他方法：细菌鉴定仪 培 养 分离培养 药敏纸片 1 day 2 day 3 day 乳胶凝集实验 0 day 取标本 取标本 PCR 快速PCR操作流程 DNA的提取 快速PCR反应 样本的采集 2Hour~4Hour ！ 如何用PCR检测SAMRSA？ PCR nuc SA （金葡特有的耐热核酸酶基因） （导致SA耐药产生的PBP2α蛋白的编码基因） PCR mecA MRSA PCR检测 Nuc — Nuc + 非SA MSSA MRSA mecA— mecA+ 检测判读流程 Nuc FAM荧光标记 mecA HEX荧光标记 本试剂盒的临床应用方向 治疗性应用 为临床诊断及正确使用抗菌素提供及时有力的依据，减少试验性治疗对病人造成的伤害，同时为挽救生命争取时间 临床应用 预防性应用 可使医院内感染的预防工作得以落实。入院及术前的监测为预防院内传播采取措施（如隔离）提供依据。 质量第一 服务第一 本产品的检测优点 1、公认的筛查“金标准” 2002年美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）指出金黄色葡萄球菌一旦检出mecA基因即可定为MRSA。PCR法检测mecA基因被公认为MRSA筛查检测“金标准”。 2、特异性高 现已明确，大量产生的一种新的青霉素结合蛋白-PBP2a是葡萄球菌对甲氧西林耐药的主要原因。mecA基因是PBP2a的编码基因，只存在于葡萄球菌中，因此mecA基因可作为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子标志。荧光PCR方法就是通过直接检测细菌染色体上的mecA基因来确定是否为耐甲氧西林菌株，不受药敏实验条