流式淋巴细胞亚群检测技术原理.ppt

淋巴细胞亚群检测 检测方法 采用流式细胞术（FCM） 是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞(或生物学颗粒)的理化特性进行多参数定量分析和分选的技术 常用荧光素 499nm 蓝色荧光（Blue） 500-549nm，绿色荧光（Green） 550-584nm，黄色荧光（Yellow） 585-615nm，橙色荧光（Orange） 616-700nm，红色荧光（Red） ≥700nm，远红外荧光（Far-Red） 常用荧光素 联合CD45的四色方案 第一种是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色标记，主要可以检测T3细胞、T4细胞、T8细胞这三种不同的亚群 CD45-FITC CD4-RD1 CD8-ECD CD3-PC5 联合CD45的四色方案 第二种是用CD45/CD3/CD19/CD16和（或）CD56做第二管的标记，用于检测T3细胞、B细胞和NK细胞 CD45-FITC CD56-RD1 CD19-ECD CD3-PC5 总T细胞增高 提示体内的T细胞免疫功能增强 见于临床某些自身免疫性疾病（如SLE）、重症肌无力、慢性活动性肝炎、甲状腺功能亢进、淋巴细胞性甲状腺炎、器官移植排斥反应、T细胞性白血病等 总T细胞降低 提示体内的T细胞免疫功能减弱 见于某些白血病、应用免疫抑制剂药、放疗过程中、先天性细胞免疫缺陷、艾滋病、多发性骨髓瘤、传染性单核细胞增多症，以及过劳等造成机体免疫功能处于相对较低的其他一些情况 T4细胞增高 提示体内存在细菌等病原微生物感染，主要见于临床各种细菌性感染性疾病。 器官移植发生排斥反应 支气管哮喘 SLE活动期 某些免疫增强药物的有效结果 注意:昼夜变化（傍晚的峰值可为上午的两倍） T4细胞降低 提示体内存在病毒等病原微生物，主要见于临床各种病毒感染性疾病，以HIV感染时减少最为明显 T4细胞减少也可见于γ免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良、严重联合免疫缺陷病、严重创伤、大手术等 T8细胞增高 提示体内存在病毒或胞内寄生菌等病原微生物感染 主要见于HIV、HBV、CMV、EB等病毒感染 也可见于结核杆菌感染等 T8细胞降低 移植排斥反应 可见于γ免疫球蛋白缺乏症 胸腺发育不良 严重联合免疫缺陷病 糖尿病等 T4/T8细胞比值增高 是T4淋巴细胞增高或T8淋巴细胞减少所致 见于某些自身免疫性疾病，如SLE、多发性硬化、器官移植排斥反应、自身免疫性溶血性贫血等 T4/T8细胞比值降低 是T4细胞减少或T8细胞增高所致 见于艾滋病、再生障碍性贫血、某些白血病、传染性单核细胞增多症、免疫缺陷综合征、某些病毒感染、恶性肿瘤、结核病等 一般来说，导致T4/T8比值倒置，以全身性、侵袭和破坏机体免疫系统的感染引起的倒置变化幅度最大 临床抗感染治疗有效时，可以观察T4/T8细胞比值的逐步恢复 T4/T8细胞比值临床意义 器官移植受者免疫功能监测 个体化免疫治疗疗效判断 受者需要的是一种恰当的免疫抑制，将免疫功能控制在较低的一个范围内。 需要经常性监测受者的免疫功能，T4/T8细胞比值是非常好的一个监测指标 当受者T4/T8细胞比值出现小于0.2的情况时，必须立即停用免疫抑制药，等待免疫功能的适当恢复 T4/T8细胞比值与肿瘤 恶性肿瘤患者术前T4/T8细胞比值低，手术后比值恢复正常 当发生癌转移时,T3、T4细胞数明显减少的同时T8细胞数明显增多 T4/T8比值明显降低,提示恶性肿瘤患者晚期细胞免疫功能更低,预后更差 B细胞增高 提示机体体液免疫功能被增强 此时体内高亲和力抗体的产生也增加 见于临床各种细菌性感染 B细胞增高也见于B细胞白血病 B细胞减少 见于原发及继发性免疫功能低下，临床可出现反复发作的呼吸道及消化道感染 见于严重病毒性感染、使用免疫抑制剂制药等情况 见于原发性B细胞缺陷病（如性联无丙种球蛋白血症）和重症联合免疫缺陷（T细胞同时缺如） 体液免疫功能不良者则减少 在生命垂危时可呈现极度减少 自然杀伤细胞 表面标记 CD3-、CD56+、CD16+ 表面受体 （1）杀伤细胞活化受体（KAR） 结合靶细胞表面糖类配体，促使NK发挥杀伤作用。 （2）杀伤细胞抑制受体（KIR） 识别自身细胞表面MHC-I类分子，产生抑制信号 无须致敏即直接杀伤靶细胞,抗感染与抗肿瘤,免疫调节 NK细胞作用及效应机制 抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC） 天然细胞毒性 NK细胞介导的凋亡 NK细胞产生的细胞因子 NK细胞受体 NK细胞 NK细胞是机体抗某些病毒、细菌、寄生虫、真菌感染的重要免疫因素，NK细胞异常在病毒感染时尤其突出。 NK细胞减少见于萨科奇病毒、脑心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒