实验4微生物的染色.ppt

第十章 微生物的实验;实验一 显微镜的使用及细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察 (一)目的 (1)掌握显微镜的结构,原理,学习显微镜的操作方法和保养. (2)观察细菌,放线菌和蓝细菌的个体形态,学会生物图的绘制. (二)实验器材 (1)显微镜,目测微计,物测微计,擦镜纸,香柏油,二甲苯. (2)示范片 大肠杆菌 小球菌 蓝藻等 ;（二）、实验内容 1.显微镜的结构 （ 1）. 机械部分 （2）.光学部分  ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;（2）光学部分a.目镜b.物镜: 低倍物镜 高倍物镜 油镜物镜的性能由数值孔径决定 数值孔径=n*sina/2显微镜的性能还依赖于物镜的分辨力分辨力:能分辨两点之间的最小距离的能力 增大数值孔径来提高分辨力.物镜 N.A.1.25,100*,”OI”,160/0.17,16mm---- N.A.1.25数值孔径 100*放大倍数 ”OI”油镜 160镜筒长 0.17要求盖玻片的厚度 16mm焦距C.聚光器d.反光镜f.滤光片 ;2.显微镜使用和保护 (1)低倍镜的使用法(2)高倍镜的使用法(3)油镜的使用法 3.目测微尺,物测微尺及其使用方法(1)目测微尺(2)物测微尺(3)目测微尺的标定(4)菌体大小的测量4.细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察 (四)实验报告;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;实验三 微生物直接计数法;四）操作步骤 （1）稀释样品 使每格约5个细胞（2）取干净的血球计数板，用厚盖玻片盖住中央的计数室，用移液管吸取少许充分摇匀的待测菌液于盖片的边缘，菌液则自行渗入计数室，5～10min即可计数（3）将血球计数板置于载物台上，用低倍物镜找到小方格网后换用高倍镜观察计数 每样品重复三次，取平均值，计算每1ml菌液中所含的酵母菌数。 （五）试验报告;实验四 微生物的染色;涂片 干燥 固定 染色 水洗 吸干 镜检; 取大肠杆菌和枯草杆菌芽孢杆菌(均以无菌操作)分别做涂片,干燥,固定.方法同单染色法 用草酸铵结晶紫染色1min,水洗. 加革氏碘液媒染色1min,水洗 斜置载玻片于一烧杯上,滴加95%酒精脱色,至流洗出的酒精不呈现紫色时,立即用水冲净酒精,脱色时间约20min,或视涂片厚薄而略有差异 用番红(或称沙黄)染液染色1~2min,水洗 吸干,置于显微镜下观察,阳性者为紫色,阴性者为红色 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度.如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌 菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应;实验五 培养基的制备及灭菌;B包装 1）培养皿牛皮纸包装 2）吸管的吸端塞棉花约1~1.5cm，(防细菌吸入口中，避免细管吹入)，松紧适宜。用包装纸包移液管尖端。 3）试管和锥形瓶等的管口均堵棉塞，并用牛皮纸 包裹。 ;2培养基的制备 A步骤 1）配制溶液 取一定容量的烧杯盛入定量无菌盐水，按培养基配方逐一称取各成分，加水溶解，可加热促进，不断搅拌以防原料在杯底烧焦。 2）调pH值 测定培养液的pH, 按要求以10%HCl or 10%NaOH 调至所需pH。 3）过滤 用纱布、滤纸、棉花均可，若杂质少可省略 ;4）分装 将培养基分装在试管或锥形瓶中（放置培养基玷污管口，避免浸湿棉塞引起杂菌污染），装入试管的量视1试管的大小定，一般斜面培养基时为其高度的1/4~1/3 5）斜面培养基的制作 将装有琼脂培养基的已灭菌的试管趁热取出，斜置于木棒上，使其斜面长度为试管的1/3~1/2，代培养基凝固后即成斜面;B 营养琼脂培养基的制备 1）培养基配方：牛肉膏0.75g，蛋白胨1.5g，氯化钠0.75g，琼脂3g，蒸馏水150ml，pH7.6 。0.1Mpa下灭菌20min. 2）操作： a取300ml烧杯一个，装150ml蒸馏水。 b 在药物天平上一次称取配方中各成分，水中溶解，带待琼脂完全溶解后停止加热，补充水分，用10%NaOH调pH =7.6，省略过滤，培养基分装五支试管中，余入25