20131501069杨蕊基于丁香天蛾全线粒基因组的分子进化研究最终.doc

2017届学士学位论文 基于丁香天全线粒基因组的分子进化研究 学院、专业 生命科学学院 生物科学 研 究 方 向 动物分子进化 学 生 姓 名 杨蕊 学 号 20131501069 指导教师姓名 李艳 指导教师职称 副教授 2017年 5 月 20 日 淮北 基于丁香天蛾全线粒基因组的分子进化研究 杨蕊 （淮北师范大学生命科学学院） （指导教师：） 摘要 关键词：was designed for the mitochondrial degenerate primer of Phosphorus spectacle and then the PCR method is used to clone the complete mitochondrial sequences of Psilogramma increta. We could obtain a complete mitochondrial sequence of closely related homologous species by comparison in the GenBank database .The ClustalX2.0 and MEGA 6.06 software were used to constructed Neighbor-Joining in order to analysis Psilogramma increta of molecular evolution .The results showed that the full-length sequence of mitochondrial Psilogramma increta is 15254bp. And it has 13 genes encoding proteins, 22 transporters RNA, 2 ribose RNA and one A- enrichment zone. phylogenetic tree analysis showed that the more recent clove Sphingidae insects and Psilogramma increta genetic relationship,they clustered into one group first and than other samples gathered into branches. Keywords: clove menephore; CO 1; Lepidoptera; molecular evolution目录 引言 1 1. 材料与方法 1 1.1动物来源 1 1.2实验仪器 1 1.3丁香天蛾总DNA提取 1 1.4 PCR扩增 1 1.5 PCR产物电泳检测与测序 2 1.6 全线粒组基因序列分析 2 2. 结果 2 3.讨论 4 参考文献 5 致谢 6 引言 本实验中所涉及到的丁香天蛾捕自安徽省淮北市淮北师范大学校园内（，-20℃保存备用。 1.4 PCR扩增  PCR扩增的第一部是获得目的基因：根据磷翅目线粒体组基因序列的特点，设计特异性引物扩增丁香天蛾全线粒体组基因序列，引物这都是由上海生工公司合成。Taq酶也购自上海生工公司，PCR反应体系（20μL）为：Template 0.5μL，引物1 0.8μL，引物2 0.8μL，10×PCR Buffer(Mg2+ free) 2μL，25mM MgCl2 1.2μL，2.5mM 4dNTP Mixture 1.6μL，Taq酶0.4μL，ddH2O 12.7μL。PCR 反应程序： 目的基因变性：把模板DNA升温至94℃保留5min，使目的基因的双链解开成为单条的DNA单链，有利于和引物的结合。 目的基因与引物的退火：经过上述的高温之后，双链的DNA解螺旋成为了单链的DNA,然后把温度调至45℃15s，72℃ 2min, 这样引物就可以根据碱基互补配对的原则和目的基因结合。这里面的引物相当于DNA复制时的冈绮片段，可以为以下的核苷酸的合成指引方向。 （3）引物的延伸：DNA与引物