乳腺癌患者来源抗Her-2neu全人源性噬菌体单链抗体的构建和初步筛选的开题报告.docx

乳腺癌患者来源抗Her-2neu全人源性噬菌体单链抗体的构建和初步筛选的开题报告

题目：乳腺癌患者来源抗Her-2/neu全人源性噬菌体单链抗体的构建和初步筛选

研究背景：

乳腺癌是世界范围内女性最常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率呈现上升趋势。Her-2/neu是一种膜上受体酪氨酸激酶，在乳腺癌中其过表达率较高，但其特异性表达使其成为一个优秀的治疗靶点。目前在临床上已经出现了针对Her-2/neu的蛋白质抗体药物，但是其毒副作用等问题也限制了它的应用。因此，开发一种更为高效和安全的抗Her-2/neu单克隆抗体具有重要意义。

研究目的：

本研究旨在从乳腺癌患者中筛选出具有抗Her-2/neu单克隆抗体的B细胞，并通过噬菌体展示技术构建全人源性单链抗体，进而初步筛选出具有特异性的单抗并进行初步验证。

研究方法：

从乳腺癌患者的外周血中分离出B淋巴细胞进行融合，筛选出具有抗Her-2/neu活性的杂交瘤细胞，并通过限制性酶切、PCR和序列分析等技术鉴定单抗的基因序列。随后将单抗的基因克隆进入噬菌体展示载体中构建全人源性噬菌体单链抗体文库，通过PHAGE-ELISA初步筛选出具有特异性的单抗并进行初步验证。

研究意义：

本研究通过从乳腺癌患者中筛选出具有高特异性的抗Her-2/neu单抗，成功构建了全人源性噬菌体单链抗体文库，并初步筛选出具有特异性的单克隆抗体。该研究结果为进一步研究抗乳腺癌单抗的开发提供了理论和实验基础。

研究难点：

该研究难点主要在于从乳腺癌患者中筛选出具有抗Her-2/neu活性的B细胞，以及通过噬菌体展示技术构建全人源性单链抗体。在筛选和构建过程中需要注意单抗的高特异性和安全性，并进行充分的验证和评价。

研究计划：

第一年：从乳腺癌患者中分离出B细胞，通过融合筛选出具有抗Her-2/neu活性的杂交瘤细胞，并鉴定单抗基因序列。

第二年：将单抗基因克隆入噬菌体展示载体中构建噬菌体单链抗体文库。

第三年：通过PHAGE-ELISA初步筛选出具有特异性的噬菌体单链抗体，并进行初步验证。