实训三细菌的简单染色和革兰氏染色.pdf
微生物与发酵工艺
微生物与发酵工艺
实训三细菌的简单染色和革兰氏
实训三细菌的简单染色和革兰氏
染色
染色
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微生物中的细菌，其细胞小而透明，用压滴片或悬滴片在光学显
微生物中的细菌，其细胞小而透明，用压滴片或悬滴片在光学显
微镜下观察时，菌体和背景没有明显的明暗差，不易看清其形态，更
微镜下观察时，菌体和背景没有明显的明暗差，不易看清其形态，更
难以识别它们的结构。因此，需要对菌体进行染色，借助于染料使菌
难以识别它们的结构。因此，需要对菌体进行染色，借助于染料使菌
体着色后颜色的反衬作用，观察细菌的形状、根本结构(壁、膜、细胞
体着色后颜色的反衬作用，观察细菌的形状、根本结构(壁、膜、细胞
质、核及内含物)及附属结构(荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等)。
质、核及内含物)及附属结构(荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等)。
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一、实验目的
一、实验目的
1.学习微生物的涂片染色的操作技术。
1.学习微生物的涂片染色的操作技术。
2.掌握微生物的简单染色、革兰氏染色
2.掌握微生物的简单染色、革兰氏染色
的根本原理和方法。
的根本原理和方法。
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二、实验原理
二、实验原理
微生物〔尤其是细菌〕的机体是无色透明的。
在显微镜下，微生物体与其背景反差小，不易看
清微生物的形态和结构。假设增加反差。那么微
生物的形态皆可以看清楚。通常用染料将菌体染
上颜色以增加反差，便于观察。
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二、实验原理
二、实验原理
微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性
微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性
电解质及其他化合物组成，所以微生物细
电解质及其他化合物组成，所以微生物细
胞表现出两性电解质的性质。经测定，细
胞表现出两性电解质的性质。经测定，细
菌的等电点在pH2—5之间，故细菌在中性、
菌的等电点在pH2—5之间，故细菌在中性、
碱性或偏酸性的环境中，都表达酸性，带
碱性或偏酸性的环境中，都表达酸性，带
负电荷，容易与带负电荷的碱性染料结合，
负电荷，容易与带负电荷的碱性染料结合，
从而使菌体染色。菌体染色分为简单染色
从而使菌体染色。菌体染色分为简单染色
和复染.
和复染.
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二、实验原理
二、实验原理
简单染色又称单染，只用一种染料使菌体着色。假设仅为在显微
简单染色又称单染，只用一种染料使菌体着色。假设仅为在显微
镜下看清细菌形态，用单染即可。
镜下看清细菌形态，用单染即可。
复染是指用两种或多种染料染细菌，目的是鉴别不同性质的细菌，
复染是指用两种或多种染料染细菌，目的是鉴别不同性质的细菌，
主要方法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。
主要方法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。
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二、实验原理
二、实验原理
革兰氏染色步骤是：先用草酸铵结晶紫染色，经媒染剂碘-碘化
革兰氏染色步骤是：先用草酸铵结晶紫染色，经媒染剂碘-碘化
钾溶液处理后用乙醇脱色，最后用沙黄染液〔也称蕃红染液〕复染。
钾溶液处理后用乙醇脱色，最后用沙黄染液〔也称蕃红染液〕复染。
如细菌能保持草酸铵结晶紫