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针刺对应激性胃黏膜损伤模型大鼠脑-肠轴的影响 正交胃粘膜损伤是一种急性胃粘膜损伤，具有炎症糜烂、浅表溃疡和胃肠出血的特点。近年来的研究表明, 针灸不仅能够促进局部胃黏膜损伤修复, 还能有效地调节整个机体的功能状态, 从而促进溃疡的愈合。针刺具有加强胃壁屏障、调整胃酸分泌的作用, 可以使外周血胃泌素减少, 胃壁G细胞内胃泌素分泌颗粒增加, 提高胃泌素贮存, 减少胃泌素释放, 同时抑制胃壁细胞泌酸小管的功能, 有助抑制胃酸分泌, 从而促进溃疡面的愈合。针刺还能使胃溃疡大鼠胃黏膜组织中6-酮-前列腺素F1α含量大幅度增高, 与此同时血栓素B2含量大幅度下降, 并通过抑制胶原纤维的过度增生等多途径达到促进溃疡修复的目的。电针“足三里”能增加血浆和胃体黏膜中降钙素基因相关肽的含量, 对外周血内皮素和一氧化氮含量起到调节作用, 使血清中超氧化物歧化酶表达提高、丙二醛表达降低, 减少胃黏膜细胞凋亡, 在促进Bcl-2基因表达的同时抑制Fas基因表达, 从而起到保护胃黏膜的作用。有研究进一步对胃黏膜损伤大鼠的胃黏膜细胞进行磷酸化抗体蛋白芯片检测, 结果显示, 电针胃经经穴对修复信号蛋白的磷酸化水平具有调节作用, 其中上调的蛋白参与细胞的增殖, 下调的蛋白参与抑制细胞凋亡。以上这些研究基本局限于从局部组织或外周血方面阐释针灸治疗胃黏膜损伤的作用机制, 而对针灸保护胃黏膜的神经调节机制方面的研究较少。本实验旨在从脑-肠轴角度探讨针刺在预防和治疗应激性胃黏膜损伤中的作用机制。 1 材料和方法 1.1 动物的鉴定实验 健康清洁级雄性Wistar大鼠40只, 体质量 (200±20) g, 由北京维通利华实验动物技术有限公司提供, 动物合格证号:SCXK (京) 2006-2009。实验过程中对动物的处置遵循中华人民共和国科技部2006年颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》。全部大鼠按相同的饲养条件喂食, 自由饮水, 适应环境1周后进行实验。将动物随机分为5组:正常组、模型1组 (与治疗组同期造模) 、模型2组 (与预防组同期造模) 、治疗组、预防组, 每组8只。 1.2 气体和标准物 β-内啡肽 (β-EP) 酶联免疫检测试剂盒 (通用型, 美国生产, 购自北京百事创新科技有限公司) , 玻璃匀浆器 (北京东胜泰博科技有限公司) , ER-182 A型电子天平、三洋超低温冰箱 (日本制造) , ZK 38 型低温离心机 (德国制造) 。 1.3 造模的制作 本实验选用无水乙醇造成应激性胃黏膜损伤模型。除正常组外, 其余各组均采用无水乙醇灌胃的方法造模。大鼠禁食不禁水36 h后, 抓取固定, 用前段润滑的灌胃针 (长约15 cm) 经口探入至贲门部 (至贲门部时有落空感) , 缓慢注入无水乙醇1 mL, 1 h后模型形成。 1.4 针刺治疗组“内关”“中蝌蚪”的方法 应激性胃黏膜损伤当属中医的“胃痛”“吐酸”等范畴, 治宜和胃止痛。穴选双侧“足三里”“内关”及“中脘”, 用0.25 mm×25 mm不锈钢毫针刺入5～10 mm, 留针20 min, 每5 min捻转行针1次, 每次持续30 s。治疗组于造模后第1天开始针刺治疗, 连续5 d;预防组连续治疗5 d后再开始造模。 1.5 移液枪提取法 实验结束后所有大鼠同时取材。先用灌胃针将10%炭粉与水做成的混悬液按0.5 mL/只灌胃, 1 h后快速断头, 取血、取脑、取胃。 取血:断头取血至加有肝素抗凝的离心管中, 4 ℃离心20 min (3 000 r/min) , 用移液枪收集上清液 (如有沉淀形成, 应再次离心) 至EP管中, 放入冰箱-80 ℃保存, 用于测定血浆β-EP的含量。 取脑:大鼠断头后, 迅速取出脑组织, 放于冰块上, 剥离下丘脑, 滤纸擦拭干净, 放电子天平称重, 然后将组织放入封闭好的EP管中, 投入液氮中冷却。将组织放入匀浆管中, 用移液枪按1∶9的比例加入生理盐水, 进行匀浆。将匀浆液放入EP管中, 放入离心机中, 以3 000 r/min离心15 min, 取上清, 放入-70 ℃冰箱中待测下丘脑中的β-EP含量。 取胃:处死大鼠, 迅速打开腹腔, 先取贲门至肛门部的消化管测量胃肠推进百分率, 然后取胃, 沿胃大弯剪开, 以生理盐水冲洗, 进行胃黏膜形态观察, 用游标卡尺测定溃疡灶大小, 计算黏膜损伤指数。 1.6 组织形态观察和血浆-ep的测定 炭粉推进百分率 (胃肠推进百分率) 计算:自贲门至肛门部的消化管不加牵引地平铺于实验台上, 测其全长和炭末前沿至贲门的距离, 计算胃肠推进百分率。胃肠推进百分率=炭粉在胃肠内的推进距离/贲门至肛门的总长度×100%。 胃组织形态观察:把剪开的胃展平于平板上, 对胃组织黏膜进行肉眼观察, 并拍照。 胃黏膜损伤指数测定:采用