BCA蛋白浓度测定试剂盒完整版BCA蛋白浓度测定试剂盒完整版.doc

BCA蛋白浓度测定试剂盒? 说明蛋白质化验试剂盒蛋白质化验试剂盒BCA 试剂A，1000 mL (No. 23225产品中) 或 500mL ( No. 23227产品中)，碳酸钠碳酸氢钠二喹啉甲酸酒石酸钠0.1 M氢氧化钠中。 BCA 试剂B , 25 mL, 包括4%硫酸铜 一次性标准白蛋白, 2mg/ mL, 10 × 1 mL 安瓿, 2 mg/ mL牛血清白蛋白(BSA) 0.9% 盐和0.05%叠氮化钠 A 或 试剂 B 在低温下运输或长期储存时出现沉淀现象，可以通过缓慢加温或轻轻搅拌溶液使沉淀物溶解。当试剂变色或确定微生物污染时请丢球试剂盒。 目录 介绍………………………………………………………………………………………..1 准备标准试剂和工作试剂………………………………………………………………..2 准备试管…………………………………………………………………………………..3 准备微型版………………………………………………………………………………..3 故障检修…………………………………………………………………………………..4 有关美国热电产品…………………………………………………………………附加信息…………………………………………………………………………………参考文献…………………………………………………………………………………美国热电（Thermo）公司二喹啉甲酸g/mL） 管号 稀释液体积（μL） BSA来源及体积（μL） BSA终浓度（μL/mL） A 0 300的原液 2000 B 125 375的原液 1500 C 325 325的原液 1000 D 175 175的B管稀释液 750 E 325 325的C管稀释液 500 F 325 325的E管稀释液 250 G 325 325的F管稀释液 125 H 400 100的G管稀释液 25 I 400 0 0=空白 加强试管协议的稀释方案（活性范围=5-250μg/mL） 管号 稀释液体积（μL） BSA来源及体积（μL） BSA终浓度（μL/mL） A 700 100的原液 250 B 400 400的A管稀释液 125 C 450 300的B管稀释液 50 D 400 400的C管稀释液 25 E 400 100的D管稀释液 5 F 400 0 0=空白 B：准备BCA的工作试剂（WR） 1.总共需要的WR的体积可以通过以下公式计算出来： （标准液+未知液）×（平行数目）×（每个样品中加入的WR体积）= 总共所需的WR体积 例如：标准的试管程序有三个未知液，每个样品做两组重复： （标准液9mL+未知液3 mL）×（平行数目2）×（2 mL）=总共所需的WR体积48mL 注意：试管程序 试管程序（样品：WR =1:20） 1、 用移液管移取每个标准品和所测样品的重复0.1ml到有标签的对应试管中。 2、 在每个管中加2.0ml的WR，混匀。 3、 封口，然后温育试管（选择时间和温度） 1）标准方案：37℃ 30min(working range=20-2000ug/ml) 2）RT方案：RT 2h(working range=20-2000ug/ml) 3）Enhanced Protocol(加强方案)：60℃ 30min(working range=5-250ug/ml) 注意：每个实验中都增加培育时间和温度，增加５６２ｎｍ的净吸光度，降低试剂的最低检测水平和方案的工作范围； 使用水浴加热管要么是标准(37°C培养)或是增强(60°C 培养)协议。使用强制的培养可能会因为热传递不均匀使其在颜色变化上引进明显的误差。 4、 使所有管子冷却至室温 5、 分光光度计设定在562nm，当比色皿中装的是水时给仪器校零。随后，确保在10min内测完所有样品的吸光度。 注意：因为BCA测定不是真正的终点，即使冷却到室温颜色还会继续变化。然而，由于在室温下颜色变化速度比较慢，所以如果在10min内测完所有试管的吸光度就不会引进明显的误差。 所有的单个标准品与所测的样品重复在562nm测得的吸光度都要减去在562nm测得的所有空白标准品的吸光度平均值。 微型板程序（样品：WR =1:8） 1、 用移液管移取25ul的WR到每一个标准品与未知样品所在的微型板中（working range=20-2000ug/ml） 注意：如果样品大小被限制为：每个未知样品和标准品只能使用10ul（sample toWR ratio=1:20）.然而，被测量的working range在这种情况下将被限制为125-2000ug/ml。 2、 每个孔中加200ul的WR，用plate shaker混30s，使其彻底混匀 3、