构建肿瘤坏死因子α刺激基因6慢病毒表达及干扰载体及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响.doc

构建肿瘤坏死因子α刺激 引用本文：陈钊，李小静，王晖. 构建肿瘤坏死因子α刺激基因6慢病毒表达及干扰载体及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响[J].中国组织工程研究，2016，20():4319-4327. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.29.009 ORCID: 0000-0001-9651-699X(陈钊) 文章快速阅读： 文题释义： 瘢痕疙瘩原始皮肤损伤范围；呈持续性生长；高起皮肤表面、质硬韧、颜色发红的结节状、条索状或片状肿块。 肿瘤坏死因子α刺激基因6：是在筛选肿瘤坏死因子α干预的人成纤维细胞cDNA 表达文库时首次发现的，其编码蛋白含277个氨基酸，属透明质酸结合蛋白家族。随着对肿瘤坏死因子α刺激基因6基因功能研究的深入，已证实该基因在正常皮肤成纤维细胞中不表达，而接受肿瘤坏死因子α、白细胞介素1等致炎因子刺激后，肿瘤坏死因子α刺激基因6在成纤维细胞中的表达可显著因子α刺激基因6(tumor necrosis factor α stimulated gene 6)具有抗炎作用，早期创面局部注射TSG-6蛋白可抑制瘢痕形成，但其参与瘢痕形成的机制尚不明确。 目的：构建人TSG-6重组慢病毒表达载体与干扰载体，建立稳定转染的过表达及干扰细胞株，观察TSG-6对瘢痕疙瘩成纤维细胞株增殖与凋亡的影响。 方法：采用酶消化法分离纯化得到人瘢痕疙瘩成纤维细胞，再以免疫组织化学法鉴定。构建pLVX-puro-TSG-6及pLVX-shRNA1-TSG-6重组慢病毒载体，感染人瘢痕疙瘩成纤维细胞，并行RT-PCR和Western blot检验各组细胞中TSG-6建成功，细胞中TSG-6的表达发生明显变化。与对照组相比，TSG-6过表达组细胞增殖减缓，凋亡率显著升高，TSG-6干扰组细胞增殖加快，细胞凋亡率降低(P 0.05)③Western blot结果显示，TSG-6过表达组Bcl-2表达显著降低，P53及Active-caspase-3明显上升(P 0.05)④结果表明，TSG-6对瘢痕疙瘩成纤维细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用，且其机制可能与下调Bcl-2 蛋 关键词： 组织构建；组织工程；瘢痕；成纤维细胞；RNA干扰；过表达；慢病毒；TSG-6基因；增殖；凋亡；国家自然科学基金 主题词： RNA干扰；瘢痕；成纤维细胞；细胞增殖；细胞凋亡 基金资助： 国家自然科学基金资助项目 缩略语： 肿瘤坏死因子α刺激基因6：tumor necrosis factor α stimulated gene 6TSG-6 Construction of recombinant lentiviral vector and interfering carrier for tumor necrosis factor alpha stimulated gene 6 and its effect on proliferation and apoptosis of human keloid fibroblasts Chen Zhao1, Li Xiao-jing1, Wang Hui2 (1Department of Plastic Surgery, the First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022, Anhui Province, China; 2Department of Plastic Surgery, the Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310009, Zhejiang Province, China) Abstract BACKGROUND: Current research has shown that tumor necrosis factor α stimulated gene 6 (TSG-6) has anti-inflammatory effect, and the scar formation can be inhibited by local injection of TSG-6 protein at the early stage of trauma. However, the mechanism of this effect is still unclear. OBJECTIVE: To construct the lentiviral expression vector and shRNA vector for