SN 1201-2003植物性饲料中转基因成分定性PCR检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1201—2003植物性饲料中转基因成分定性PCR检测方法Protocol of PCR for detection of genetically modified feed2003-09-01实施2003-03-17发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1201—2003前言本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国深圳出人境检验检疫局负责起草，中国进口商品检验技术研究所参加起草。本标准主要起草人：章桂明、王颖、余道坚、康林、杨伟东、金显忠、程颖慧、陈枝楠、徐宝梁。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1201—2003植物性饲料中转基因成分定性PCR检测方法1范围本标准规定了饲料中转基因成分的定性检测方法。本标准中定性检测方法适用于以转基因大豆 Roundup Ready;转基因玉米（BT11、BT176、MON810、T14/25、CBH351)和转基因油菜籽（抗草甘麟除草剂、抗草丁麟除草剂、雄性不育）为原料所加工的饲料中转基因成分的定性检测。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修改版均不适合于本标推，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适合于本标推。SN/T 0798进出口粮油饲料检验‧检验名词术语SN/T 1193基因分析检测实验室技术要求SN/T 1194 植物及其产品中转基因成分检测抽样和制样方法SN/T 1196玉米中转基因成分定性 PCR检测方法SN/T 1197油菜籽中转基因成分定性 PCR 检测方法SN/T 1204植物及其加工产品中转基因成分实时荧光 PCR定性检验方法3 术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。3. 1转基因饲料 genetically modified feed (GMF)通过基因重组技术获得的基因改良生物加工而成的饲料。3.2聚合酶链式反应polymerase chain reaction (PCR)模板 DNA先经高温变性为单链,在适宜的温度下和缓冲溶液中,两条引物分别与模板 DNA 两条链上的一段互补序列发生退火，接着在DNA 聚合酶的催化下以四种 dNTP为底物，使退火引物得以延伸，如此反复变性、退火和DNA合成循环，使位于两段引物序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。3.3定性检测 qualitative detection对样品中转基因成分进行检测，以判定该样品是否为转基因产品。3. 4缩略语3. 4.1 GMO:genetically modified organism,转基因生物。3.4.2CaMV 35S:35S promoter from cauliflower mosaic virus,花椰菜花叶病毒 35S启动子。 SN/T 1201—20033. 4. 3 NOS:terminator of nopaline synthase gene from Agrobacterium tumefaciens,来源于农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子。3.4. 4 CP4 EPSPS:5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase gene,5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因。3.4.5 RRS:Roundup ReadyrM Soybean,美国 Monsanto 公司转基因抗除草剂大豆。3. 4.6 IVR:Invertase 1 gene from maize,玉米转化酶 1 基因。3.4.7 NptI : neomycin-3-phosphotransferase gene,新霉素-3-磷酸转移酶基因。3. 4.8 CrylA(b): a synthetic gene encoded the first 648 amino acids, insecticidal-active truncatedproduct identical to that of cryIA(b) gene of Bacillus thuringiensis subsp, Kurstaki steain HD-1 苏云金芽孢杆菌结晶蛋白（Cry）I型毒素抗虫基因。4　原理转基因饲料定性检测是利用外源基因与植物本身基因的不同,通过设计只能扩增外源基因中 DNA片段的引物和进行PCR扩增，根据实验结果，判定该饲料是否带有外源基因成分。5 试剂5. 1 SDS 提取液:1.5%SDS,EDTA-Na2 100 mmol/L(pH 8. 0), Tris-HCl 20 mmol/L(p