SN_T 1310-2011动物结核病检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1310—2011代替 SN/T1310—2003动物结核病检疫技术规范Quarantine protocol for animal tuberculosis2011-05-31发布2011-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1310--2011前 創言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草，本标准代替SN/T1310—2003《猴结核皮内变态反应操作规程》。本标准与SN/T1310一2003相比，主要技术变化如下：一修改了标准的名称；增加了细菌学检查方法；增加了实时荧光 PCR方法；增加了常规 PCR检测方法；增加了其他动物结核皮内变态反应试验方法。本标准参考了世界动物卫生组织(OIE)发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》(2009版)中 2.4.7章Bovine tuberculosis和 2. 3. 6 章Avian tuberculosis”本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国北京出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈茹、许如苏、田纯见、史夏玲、吴晓薇、曾碧健、苏世敏、罗长保、周科、鱼海琼、洪琼华、孙岩松。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1310-2003。 SN/T 1310--2011动物结核病检疫技术规范1 范围本标准规定了动物结核病的结核菌素皮内变态反应试验、细菌学检查、实时荧光聚合酶链式反应(PCR)和常规 PCR检测方法的技术要求。本标准适用于进出境牛、猪、猴、禽等动物结核病的检疫和诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求3缩略语下列缩略语适用于本文件。PPD(purified protein derivative）：提纯蛋白衍生物，提纯结核菌素IU(international units)：国际单位PCR(polymerase chain reaction):聚合酶链式反应EDTA(ethylene diaminetetraacetic acid):乙二胺四乙酸PBS(phosphate buffer solution):磷酸盐缓冲液dNTP(deoxyribonucleoside triphosphate):脱氧核苷酸三磷酸Tag 酶:Tag DNA 聚合酶UDG(uracil DNA glycosylase):尿嘧啶 DNA 糖基化酶DMSO(dimethyl sulfoxide):二甲基亚砜bp(base pair):碱基对4生物安全要求样品采集、样品处理及检测过程所涉及的实验操作，应遵守GB19489的有关规定。5 结核菌素皮内变态反应试验5.1器材5.1.1 弯剪。5.1.2 卡尺。5.1.3注射器：可采用医用玻璃卡介苗注射器、皮试专用连续注射器或1mL一次性无菌注射器，针头规格为0.5 mmX10 mm。5.1.4 脱脂棉。1 SN/T 1310—20115.2 试剂5.2.1灭菌生理盐水。5.2.2牛型PPD:根据使用说明将原液用灭菌生理盐水或稀释用水稀释为使用浓度。PPD冻干粉稀释：在无菌状态下吸取一定量的灭菌生理盐水或稀释用水，注人冻干粉玻璃瓶中，充分摇匀后使用，应现配现用。5.2.3禽型PPD:配制方法同5.2.2。5.2.4人型PPD:配制方法同5.2.2。5.2.575%酒精。5.3牛结核皮内变态反应试验5.3.1、操作方法与结果判定可单独采用牛型PPD,也可同时采用牛型PPD和禽型PPD逆行试验。注射部位在颈侧中部上三分之一处或尾根部。3个月以内的特牛也可在肩胛部进行。应确认注入皮内。颈部术部剪毛，直径约10cm，用卡尽测量术部中央皮皱厚度，作好记录，术部应无病变。牛型和禽型PPD 的注射部位应间隔开，在颈部同侧应间隔约-12-cm-15-cm,或在不同侧进行。用 75%酒精消毒注射部位,在皮内注人牛型PPD或离型PPD,剂量为牛型PPD舒头0.1mL、不低于2000IU,或按试剂说明书配制的剂量；禽型PPD每头0.1mL、不低于2000IU,或按试剂说明书配制的剂量。注射后72 h观察判定结果。仔细观察局部有无发热、肿胀等炎性友应，用卡尺测量皮皱厚度，注射前后同一部位的卡尺测量方向应保持一致。在记录表上作好详细记录。5.3.2单独采用牛型 PPD颈部注射。术部注射前后皮差大于或等手4mm，或出现典型炎性反应，判为阳性；皮厚差大于2mm并小于4mm，且无典型炎性反应判为可；皮厚差小于龄等予2mm，无典型炎性反应，判为阴性。对于已