子宫内膜间质细胞体外损伤模型的建立.pdf

·274 ．基础研究． 子宫内膜问质细胞体外损伤模型的建立 杨晓清 张沐 张玉泉唐小军 李伟 徐-X-毒0杨兵 【摘要】 目的探讨子宫内膜间质细胞(ESC)体外损伤模型的建立方法。方法选择2010年 6月至12月在南通大学附属医院因子宫肌瘤或宫颈上皮内瘤变行子宫切除患者的子宫内膜组织标 本16份，其中增生期8份，分泌期8份。(1)分离、原代培养增生期及分泌期ESC，并鉴定。(2)通过 活细胞计数法(CCK一8)检测不同浓度米非司酮作用不同时间及米非司酮撤药后不同时间对ESC增 48h后撤 殖抑制率的影响。(3)以米非司酮60斗mol／L为实验组，未加米非司酮为对照组，处理ESC 药，继续培养48h。观察细胞形态变化，流式细胞仪检测增生期、分泌期ESC凋亡率。用荧光定量 PCR技术和蛋白印迹法检测ESC中血管内皮生长因子(VEGF)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase) 3、8、9mRNA和蛋白的相对表达水平。结果(1)16份子宫内膜标本均成功分离并培养ESC。(2) ESC增殖抑制率与米非司酮作用的浓度及时间均呈正相关。撤药后，ESC在一定浓度范围内随撤药 时间的延长增殖能力有所恢复，但当米非司酮浓度为100 I．Lmol／L时，撤药后ESC增殖能力难以恢复。 48 (3)实验组以米非司酮60¨mol／L处理ESCh后撤药，继续培养48h，可见ESC细胞间距增大，呈 长梭形，胞质出现空泡化现象。实验组和对照组增生期ESC凋亡率分别为(52±12)％和(13±5)％， 分泌期分别为(53±6)％和(32±3)％，分别比较，差异均有统计学意义(P0．05)。增生期实验组和 对照组VEGFmRNA相对表达水平为0．52±0．12、1．00±0．17，分泌期实验组与对照组分别为0．19± 0．03、0．81±0．07，两组分别比较，差异有统计学意义(P0．05)；实验组增生期与分泌期VEGF蛋白 相对表达水平均明显低于对照组(P0．05)。增生期实验组与对照组caspase一3、8、9mRNA的相对表 两组分别比较，差异均有统计学意义(P0．05)；与对照组比较，实验组在增生期与分泌期caspase一3 2．65倍和3．50倍；分别比较，差异有统计学意义(P0．05)。结论60斗mol／L米非司酮作用于ESC 48 h后撤药，继续培养48h后可作为ESC的体外损伤模型。 【关键词】 子宫内膜； 间质细胞；米非司酮；细胞，培养的；模型，生物学 Establishmentof endometrialstromalcellsmodelinvitro YANG damaged Xiao—qing+．ZHANG Xiao Obstetricsand Mu，ZHANG jun，LIWei，x(，Yun—zhao，YANG of Yu—quan，TANG Bing．‘Department Gynecology，AffiliatedHospitalofNantongUniversity，Nantong226001，China author：ZHANG cn Corresponding Yu—quan，Email：jsnt_zhangyuquan@yahoo．C01Tk To themethodof endometrialstromalcells 【Abstract】0bjectiveinvestigate establishingdamaged 1 invitro．Methods toDecember201ESCfromnonztalend