小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)说明书活性.pdf

小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶 （AMPK）酶联免疫分析 （ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相 关液体样本中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK ）活性。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK ）水平。 用纯化的小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包 被单抗的微孔中依次加入磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶 （AMPK ），再与 HRP 标记的磷酸化腺 苷酸活化蛋白激酶（AMPK ）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后 加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄 色。颜色的深浅和样品中的磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（ AMPK ）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白 激酶（AMPK ）活性浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存 说明书 1 份 1 份 封板膜 2 片（48） 2 片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：27U/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂 A 液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂 B 液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml ×1瓶 6ml ×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml ×20 倍）×1瓶 （20ml ×30 倍）×1瓶 2-8℃保存 样本处理及要求 ： 1.血清：室温血液自然凝固 10-20分钟，离心 20 分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 10-20分钟后， 离心 20 分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再 次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20 分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中 如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 1 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS （PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓 度达到 100 万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 2