第十一章植物的遗传转化技术.ppt

（7）显微注射法 利用显微微注射法（microinjection）进行基因导入时，通常需先把原生质或培养的细胞固定在琼脂、低熔点的琼脂糖或alginate 中，或用聚赖氨酸处理附着在玻璃平板上，也可通过一固着的毛细管将原生质体吸着在管口，再进行操作，即通过一极细的毛细管将一定量的DNA 注入细胞内，甚至直接注入核内。在这方面，瑞士的诺豪斯（Neuhaus）等人已发展出一套完整的技术。用此法已在烟草、油菜、苜蓿等植物的原生质体上获得成功。微注射法的优点是转化效率高，在用线形DNA 的一些试验中，转化效率甚至高达60％以上，无需特殊的选择系统，并且没有农杆菌宿主范围的局限性。今年这一技术也用于培养细胞或胚性细胞团等。 三、转基因植株再生及其检测 1、转基因植株的再生 转基因植株的再生与一般组织培养的再生的方式相同，主要区别在于转基因植株的再生受外源基因、载体系统、受体系统、抗生素、转化过程等的影响。 2、转基因植株的检测 标记基因的检测 标记基因是用来区分目的基因转化细胞和非转化细胞的一类特殊基因。按功能分为选择标记基因和报道(告)基因。 选择标记基因包括抗生素抗性基因和抗除草剂基因，如：kan、hyg、neo、amp、npt等 　 报告基因指其编码产物能够被快速的测定，常用来判断外源基因是否已经成功地导入寄主细胞（器官或组织）并检测其表达活性的一类特殊用途的基因。如gus、luc、gfp等 目的基因整合水平的鉴定 PCR、Southern杂交等 目的基因转录水平上的检测 Northern杂交、RT-PCR 外源基因翻译水平上的检测 ELISA检测、Western杂交 其他方法如生物学鉴定、基因芯片检测技术等 四、转基因植物的研究成果及安全性 Bt transformed cotton untransformed cotton WT and Transgenic Rice WT “golden rice” 转基因技术新物种蓝色玫瑰惊现东京 Problems and potential 谢谢大家！ 第十一章　植物的遗传转化技术 主要内容： 第一节 植物遗传转化的受体系统 第二节 植物遗传转化方法 第三节 转基因植株再生及其检测 学习的目标与要求： 了解植物遗传转化系统的定义及种类，了解植物遗传转化的方法，掌握农杆菌转化的原理。了解转基因植物的再生、检测方法、应用及其安全性。 遗传改良是提高作物产量和品质的重要途径。传统方法限制在种个体间实现基因转移，对后代的可预见性较差，同时周期长。 转基因技术(transgene technology)是指将人工分离和修饰过的外源基因导入生物体的基因组中，从而使生物体的遗传性状发生改变的技术。 转基因植物(transgenic plant)是指利用重组DNA技术将克隆的优良目的基因整合到植物的基因组中，并使其得以表达，从而获得具有新的遗传性状的植物。 成功的基因转化首先依赖于良好的植物受体系统的建立。所谓植物转化受体系统是指用于转化的外植体通过组织培养途径或其它非组织培养途径（如发苗产生子叶、胚轴等），能高效、稳定地再生无性系，并能接受外源DNA整合，对转化选择抗生素敏感的再生系统。 一、植物遗传转化的受体系统 1、建立植物转化受体系统的主要考虑因素 高效稳定的再生能力 较高的遗传稳定性 具有稳定的外植体来源 对选择性抗生素敏感 对农杆菌侵染具有敏感性 2、再生系统的选择 （1）选择年幼的外植体：易于脱分化 （2）选择增殖能力强的外植体 （3）选择萌动期的外植体 （4）选择具有强再生能力基因型的外植体 （5）遗传稳定性好 　　　总体来看，主要采用胚、幼惠、顶端分生组织、幼叶、幼茎等。 3、植物基因转化受体系统的类型 （1）愈伤组织再生系统： （2）悬浮细胞受体系统： （3）生质体再生系统： （4）胚状体再生系统：最为理想的基因转化受体系统 （5）生殖细胞受体系统（种质系统）： （6）叶盘受体系统 （6）整株活体受体系统 4、植物基因转化受体系统的建立程序 （1）外植体的选择制备 （2）高频再生系统的建立 外植体的选择、最佳培养基的确定 （4）抗菌素的敏感性试验 既有效抑制细菌生长，又不影响植物的正常生长。 （5）农杆菌的敏感性试验等 选择侵染敏感的农杆菌种类 植物遗传转化的受体系统 二、植物遗传转化方法 1、